第一部分：饲料中汞、砷的测定
原理
动物源性食品是食品行业的中的重要组成，在其生产过程中，过量的有毒有害物质，特别是重金属元素通过所饲养的动物排泄到土壤或水域中，对人类的生存环境构成威胁。为维护我国动物源性食品安全，农业农村部下达第194号文件，决定加强饲料商品管理。其中重金属元素汞毒性强，是饲料样品中重要的检测指标。
试样经酸加热消解后。在酸性介质中,试样中汞被硼氢化钾(KBH.)或硼氢化钠(NaBH,)还原成原子态汞,由载气(氩气带人原子化器中，在特制汞空心阴极灯照射下，基态汞原子被激发至高能态,在去活化回到基态时,发射出特征波长的黄光,其荧光强度与汞含量成正比，与标准系列比较定量。
标准依据GB/T 13081-2022；GB/T 13079-2022
仪器及试剂
AFS-680原子荧光光度计。
汞空心阴极灯；
砷空心阴极灯；
微波消解炉；
实验室用样品粉碎机或研钵。
硝酸( 优级纯)。
30%过氧化氢。
硫酸(优级纯)。
混合酸液硫酸 +硝酸+水(1+1+8):量取10 mL硝酸(4:2.1)和10 mL硫酸(4.2.3),缓缓.倒人80mL水中,冷却后小心混匀。
硝酸溶液（1+9）:量取50 mL硝酸,缓缓倒入450 mL水中,混匀。
氢氧化钾溶液(5 g/L):称取5.0g氢氧化钾,溶于水中,稀释至1 000 mL,混匀。
硼氢化钾溶液(5 g/L):称取5.0 g硼氢化钾,溶于5.0 g/L的氢氧化钾溶液中,并稀释至1000mL,混匀,现用现配。
汞、砷标准储备溶液:按GB/T602--2002中规定进行配制,或者选用国家标准物质一汞标准溶液(GBW 08617),此溶液每毫升相当于1000ug汞。
汞标准工作溶液:吸取汞标准储备液1 mL于100 mL容量瓶中,用硝酸（1+9）溶液稀释至刻度,混匀,此溶液浓度为10 ug/mL.再分别吸取10 ug/mL汞标准溶液1 mL和5 mL于两个100 mL容量瓶中，用硝酸（1+9）溶液稀释于刻度,混匀,溶液浓度分别为100 ng/mL和500 ng/mL,分别用于测定低浓度试样和高浓度试样,制作标准曲线,现用现配。
砷标准工作溶液(100ng/mL):准确移取10mL,砷标准中间溶液(1ｕg/mL)于100mL容量瓶中，加入1m盐酸溶液(1+1),用水稀释、定容,混匀,有效期为1周。

分析步骤
微波消解法
称取0.20g~1.0g试样,精确到0.0001 g,置于消解罐中加人2 mL~10 mL硝酸，2mL~4mL过氧化氢,盖好安全阀后,将消解罐放人微波炉消解系统中，根据不同种类的试样设置微波炉消解系统的最佳分析条件(见表1和表2),至消解完全,冷却后用硝酸溶液洗涤消解罐并定容至50 mL容量瓶中(低含量试样可定容至25 mL容量瓶)混匀待测。同时做试剂空白试验。


标准系列配制
低浓度标准系列:分别吸取100ng/mL汞标准使用液0. 50mL、1. 00mL、2. 00 mL、4. 00 mL、5. 00 mL于50 mL容量瓶中,用硝酸溶液稀释至刻度,混匀。各自相当于汞浓度1.0 ng/mL.2.0 ng/mL.4. 0 ng/mL.8. 0 ng/mL.10. 0 ng/mL.此标准系列适用于-般试样测定。
高浓度标准系列:分别吸取500ng/mL汞标准使用液0. 50 mL、1. 00 mL.2. 00 mL、3. 00 mL.4.00 mL于50 mL容量瓶中,用硝酸溶液稀释至刻度,混匀。各自相当于汞浓度5. 0 ng/ mL、10.0 ng/mL.20. 0 ng/mL.30. 0 ng/ mL.40.0 ng/mL.此标准系列适用于鱼粉及含汞量偏高的试样测定。
分别准确移取适量体积的砷标准工作溶液于50ml容量瓶中,补水至约40ml,加人2.5 ml 盐酸,混匀。缓慢加入5mL,硫脲-抗坏血酸溶液,加水定容,混匀,配制成浓度分别为0ng/ml、0.50ng/ml、1.00ng/ml、4.00ng/ml、8.00ng/ml、16.00 ng/ml,的砷标准系列溶液。

仪器参考条件
光电倍增管负高压:260V;汞空心阴极灯电流:30mA;原子化器:温度300C,高度8.0mm;氩气流速:载气500mL/min,屏蔽气1000mL/min;测量方式:标准曲线法;读数方式:峰面积;读数延迟时间:1.0 s;读数时间:10.0 s;硼氢化钾溶液加液时间:8.0 s;标准或样液加液体积:2 mL。仪器稳定后，测标准系列，至标准曲线的相关系数r>0.999后测试样。
浓度测定方式:设定好仪 器最佳条件,逐步将炉温升至所需温度后,稳定10 min~20 min后开始测量。连续用硝酸溶液进样,待读数稳定之后,转入标准系列测量,绘制标准曲线。转入试样测量,先用硝酸溶液进样,使读数基本回零,再分别测定试样空白和试样消化液,每测不同的试样前都应清洗进样器。
仪器自动计算结果方式:设定好仪器最佳条件,在试样参数画面输入以下参数:试样质量(g),稀释体积(mL),并选择结果的浓度单位,逐步将炉温升至所需温度,稳定后测量。连续用硝酸溶液
进样,待读数稳定之后,转人标准系列测量,绘制标准曲线。在转入试样测定之前,再进人空白值测量状态,用试样空白消化液进样,让仪器取其均值作为扣底的空白值。随后即可依法测定试样。测定完毕后,选择“打印报告”即可将测定结果自动打印。

计算


式中:
ω试样中汞/砷的含量，单位为毫克每千克(mg/kg); .
C-试样消化液中汞的含量,单位为纳克每毫升(ng/mL);
C0-试剂空白液中汞的含量,单位为纳克每毫升(ng/mL);
V--试样消化液总体积,单位为毫升(mL);
m-试样质量,单位为克(g)。
测定结果以平行测定的算术平均值表示，保留两位有效数值；
精密度
在重复性条件下，获得的两次独立测量结果与算术平均值的绝对差值与该算术平均值的比值及相对偏差r应符合下表要求；

测定结果/(mg/kg)	相对偏差（r）%
≤0.020	≤100
0.020-0.100	≤50
≥0.100	≤20

 
 
第二部分：饲料中总磷的测定  分光光度法
1.范围 本标准规定了用钼黄分光光度法测定饲料中总磷量的方法。
本标准适用于饲料原料(除磷酸盐外)及饲料产品中磷的测定。

2、引用标准
下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时，所示版本均为有效。所有标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。
GB/T6437-2002

3.原理 将试样中的有机物破坏，使磷元素游离出来，在酸性溶液中，用钒钼酸铵处理，生成黄色的 [(NH4)3P04NH4VO3 ·16MoO3〕络合物，在波长400 nm下进行比色测定。

4.试剂 实验室用水应符合 GB/T 6682中三级水的规格，本标准中所用试剂，除特殊说明外，均为分析纯。
4.1， 盐酸溶液:1+1
4.2 硝酸。
4. 3 高氯酸。
4.4 钒钼酸铵显色剂:称取偏钒酸铵 1. 25 g，加水 200 mL加热溶解，冷却后再加入 250 ml硝酸 (4.3)，另称取钼酸铵25 g，加水400 mL加热溶解，在冷却的条件下，将两种溶液混合，用水定容至 1 000 ml，避光保存，若生成沉淀，则不能继续使用。
4.5 磷标准液:将磷酸二氢钾在 105摄氏度干燥 1h，在干操器中冷却后称取0.2195g溶解于水，定量转入1 000 ml容量瓶中，加硝酸 3 mL，用水稀释至刻度，摇匀，即为50 ug/mL的磷标准液.

5、仪器和设备
5.1 实验室用样品粉碎机或研钵。5.2 分样筛:孔径0.42 mm(40目)。 5. 3 分析天平:感量0. 0001 g, 5.4 V-1500型分光光度计:可在 400 nm下测定吸光度。5. 5 比色皿:1 cm 5.6 高温炉:可控温度在(55。士20)'C. 5.7 瓷坩埚:50 ml,.5.8 容量瓶:50.100,1000 ml
5.9 移液管:1.0,2. 0,5.0,10.0 ml. 5.10 三角瓶:250 ml。 5.11 凯氏烧瓶:125,250 ml。 5.12 可调温电炉:1000W

6.试样制备
取有代表性试样2 kg，用四分法将试样缩分至250 g，粉碎过0.42 mm孔筛，装入样品瓶中，密封保存备用。

7、测定步骤
7.1 试样的分解
7.1.1 干法{不适用于含磷酸氢钙[Ca(H2PO4)2]的饲料} 称取试样 2 g-5 g(精确至。.0002g)于柑涡中，在电炉上小心炭化，再放人高温炉，在 550 C灼烧 3 h(或测粗灰分后继续进行)，取出冷却，加人 10 mL盐酸(4-1)和硝酸(4.2)数滴，小心煮沸约10 min, 冷却后转入 100 ml容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，为试样分解液。
7.1.2 湿法
称取试样 0.5 g-5 g(精确至0. 000 2 g)于凯氏烧瓶中，加人硝酸(4.2)30 mL，小心加热煮沸至黄 烟逸尽，稍冷，加人高氯酸(4.3)10 m工，继续加热至高氯酸冒白烟(不得蒸干)，溶液基本无色，冷却，加 水 30 ml，加热煮沸，冷却后，用水转入 100 mL容量瓶中并稀释至刻度，摇匀，为试样分解液。
7.1.3 盐酸溶解法(适用于微量元素预混料) 称取试样。.2g^1 g(精确0.0002g)于100 mL烧杯中，缓缓加入盐酸(4. 1)10 mL，使其全部溶解，冷却后转入 100 ml容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，为试样分解液。
7.2 工作曲线的绘制 准确移取磷标准液(4. 5)0.0,1.0,2.0,4.0,8.0,16.0 ml于 50 mL容量瓶中，各加钒钼氨酸显色剂(4. 4) 10 ml ，用水稀释到刻度，摇匀，常温下放置 10 min以上，以0.0 mL溶液为参比，用 1 cm比色 皿，在 400 nm波长下用分光光度计测各溶液的吸光度。以磷含量为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制工作曲线.
7.3 试样的测定 准确移取试样分解液 1. 0 mL-10. 0 mL(含磷量50ug-750 ug)于50 mL容量瓶中，加人钒钥酸 钱显色剂(4.4)10 mL，用水稀释到刻度，摇匀，常温下放置 10 min以上，用 1 cm 比色皿在 400 nm波长下测定试样分解液的吸光度 ，在工作曲线上查得试样分解液的磷含量。

8 测定结果的计算及表述
8.1  结果计算
测定结果按式(1)计算：

x一 以质量分数表示的磷含量%;
m1 一 由工作曲线查得试样分解液磷含量ug;
V- 试样分解液的总体积ML;
m一 试样的质量g;
V1 一试样测定时移取试样分解液体积mL
8.2 结果表示
每个试样称取两个平行样进行测定，以其算术平均值为测定结果，所得到的结果应表示至小数点后两位

9 允许差
含磷量 0.5%以下.允许相对偏差 10%;含磷量 0.5%以上，允许相对偏差 3%.
 
第三部分：饲料中镉、铅的测定
1.范围
本文件描述了饲料中镉测定的火焰原子吸收光谱法和石墨炉原子吸收光谱法。
本文件适用于配合饲料,浓缩饲料、精料补充料、添加剂预混合饲料、饲料添加剂和饲料原料中镉的测定。
本文件中当取样量5g,定容体积为50ml,时,火焰原子吸收光谱法的镉检出限为0.08mg/kg,定量限为0.20mg/kg。
当取样量5g,定容体积为50mL时,火焰原子吸收光谱法的铅定量限为2mg/kg;当取样量1g,定容体积为10ml,时。
定量限为0.05mg/kg。

2.原理
镉：试样经干灰化或湿消解(微波消解)、或盐酸溶解后,导人原子吸收分光光度计的火焰原子化器中,在波长228.8nm处测定吸光度值,在一定的浓度范围内,镉浓度与其吸光度值成正比,标准曲线校准定量。
铅：试样经干灰化、酸溶或湿消化后,使铅溶出,用原子吸收光谱仪在283.3nm处测定吸光度值,并与标准曲线进行比较定量。

3.试剂或材料
警告:使用各种强酸时应在通风橱中进行:使用高氯酸消解时注意不要烧干,防止爆炸除非另有规定,仅使用分析纯试剂。
水:GB/T6682,一级。
硝酸:优级纯。
盐酸:优级纯
高氯酸:优级纯。
硝酸溶液(6mol/L)。
硝酸钯溶液(2mg/ml)。
磷酸二氢铵溶液(10mg/ml)。
镉标准储备溶液(1mg/ml)。
镉标准中间溶液(10μg/mL)。
镉标准中间溶液Ⅱ(100μg/L)，临用现配。
镉标准系列溶液:准确移取适量体积的镉标准中间溶液I(5.11)分别置于50mL容量瓶中,用硝酸溶液(5.6)稀释至刻度,混匀,配制成浓度分别为0μg/mL、0.02μg/mL、0.04μg/mL、0.06μg/ml、0.08μg/mL、0.10μg/ml的标准系列溶液。临用现配。
镉标准系列溶液Ⅱ:准确移取适量体积的镉标准中间溶液Ⅱ(5.12)分别置于50mL容量瓶中,用硝酸溶液(5.6)稀释至刻度,混匀,配制成浓度分别为0μg/L、0.5μg/L、1.0μg/L、2.0μg/L、3.0μg/L、4.0μg/L、的标准系列溶液。临用现配。
铅标准储备溶液(1.0mg/mL)。
铅标准中间溶液(10.0μg/mL)。
铅标准工作溶液(100ng/ml)。
乙炔:应符合GB6819-2004中3.1的要求
中速滤纸。

4.仪器设备
原子吸收分光光度计（AA1800F）火焰原子化器和镉空心阴极灯。
分析天平:感量0.0001g和0.01g。
马福炉:温度能保持在500℃±15℃。
瓷坩埚:60cm”,内壁光滑,没有被腐蚀,无刮痕。
消解管。
可调式电热板或可调式电炉:温度范围100℃~400℃,精度±5℃。
微波消解仪:带聚四氟乙烯消解罐。
注:所用的坩埚、消化内罐、玻璃器皿容器先用含清洁剂的热水超声清洗干净后,用水冲洗、晾干,再用硝酸溶液(5.7)浸泡2h.用水冲洗干净,晾干后使用。

5.样品
镉：按GB/T20195制备样品,至少200g,粉碎使其全部通过0,425mm孔径的分析筛,装人密闭容器中,备用。饲料添加剂样品的粒度按照相应产品标准规定执行。
铅：依照 GB/T 14699.1进行饲料采样,并按GB/T 20195制备试样,粉碎,过1mm尼龙筛,混匀装入密闭容器中,备用。

6.实验步骤
6.1试样溶液制备
6.1.1干灰化法
适用于配合饲料、浓缩饲料、精料补充料以及含有机物的添加剂预混合饲料、饲料添加剂和饲料原料。
平行做两份试验。称取试样5g(精确至0.01g)于瓷坩中,放置于可调式电热板或可调式电炉上缓慢加热炭化至无烟后,转入500℃马福炉中灰化5h,直至试样呈白色或灰白色、无碳粒为止。如发现有少量碳粒时,可滴人硝酸溶液(5.7)使残渣润湿,将瓷坩埚移至可调式电热板或可调式电炉上小火干燥,再移至马福炉中继续灰化至试样呈白色或灰白色,无碳粒。
取出坩埚,冷却至室温。吸取5ml盐酸溶液(5.5),逐滴加入到瓷坩埚中,边加边转动,直到溶液无气泡溢出,然后加入剩余盐酸溶液,再加5ml硝酸溶液(5.7),将瓷坩埚移至可调式电热板或可调式电炉上,缓慢加热直到消化液至2ml~3mL(注意防止溅出)时,取下,冷却至室温。将消化液转移到50ml,容量瓶中,用少许水多次冲洗瓷坩埚壁,并入容量瓶中,加水定容,摇匀,过滤,备用。同时做空白试验。

6.1.2湿消解法
适用于含有机物较多的添加剂预混合饲料、饲料添加剂和饲料原料平行做两份试验。称取试样1g(精确至0.0001g)于消解管中,加少量水润湿,加人10ml,硝酸(5.2),置于通风橱,静置2h后,加人5ml,高氯酸(5.4),在温度低于250℃的可调式电热板或可调式电炉上小火加热消化,待消化液冒白烟为止,取下,冷却。将消化液转移至50ml,容量瓶中,用少许水多次冲洗消解管,并人容量瓶中,加水定容,摇匀,过滤,备用。同时做空白试验。

6.1.3 微波消解法
适用于配合饲料、浓缩饲料、精料补充料以及含有机物的添加剂预混合饲料、饲料添加剂和饲料原料。
平行做两份试验。称取 0.3g~0.5g试样(精确至0.0001g)于消解中,加人6ml,硝酸(5.2),旋紧罐盖,放置2h或静置过夜,旋紧罐盖,盖好安全阀,将消解罐放人微波消解仪中,按照表1和微波消解仪的操作步骤与程序进行消解。消解结束后,取出,冷却至室温。如果试样消解液中残酸量过大,将其置于可调式电热板或可调式电炉上加热赶酸,至体积1ml~2mL时,取下,冷却。将消化液转移至10ml,或 25ml,容量瓶中,用少许水多次冲洗消解罐,并入容量瓶中,加水定容,摇匀,过滤,备用。同时做空白试验。


6.1.4盐酸溶解法
适用于矿物质饲料原料和矿物元素饲料添加剂。
平行做两份试验。称取试样0.5g~2g(精确至0.0001g)于150ml锥形瓶中,加2ml水将试样润湿,取10mL盐酸溶液,逐滴加入到锥形瓶中,边加边转动,直到溶液无气泡溢出,然后将剩余盐酸溶液全部加人,再加入5ml硝酸溶液,将锥形瓶移至可调式电热板或可调式电炉小火加热消化至2ml~3mL(注意防止溅出),取下,冷却。将溶液转移至25mL或50mL容量瓶中,用少许水多次冲洗锥形瓶,并入容量瓶中,加水定容,摇匀,过滤,备用。同时做空白试验。

6.2原子吸收光谱测定参考条件
根据各自仪器性能调至最佳状态,火焰原子吸收光谱法仪器参考条件见表2。


6.3测定
6.3.1 火焰原子吸收光谱法
将仪器设置为扣背景模式,并调至最佳工作状态,用水或曲线零点调零,在元素特征波长228.8nm处,依次测定空白溶液、镉标准系列溶液I(5.13)和试样溶液的吸光度值,以镉标准系列溶液1(5.13)的镉浓度为横坐标,吸光度值为纵坐标,绘制标准曲线,标准曲线相关系数r≥0.999。试样溶液的吸光度值应在标准曲线线性范围内,若超出,可参照镉标准系列溶液1(5.13)的酸浓度进行适度稀释(n倍)后测定。
7.实验数据处理