细胞复苏的主要步骤和注意事项
2025-07-31 来源:本站 点击次数:3
细胞复苏是将冷冻保存的细胞从低温环境（如液氮或-80℃冰箱）中取出，迅速解冻并恢复到正常生长状态的过程。
以下是细胞复苏的主要步骤和注意事项：
准备阶段：
解冻后，用酒精棉球擦拭冻存管外壁，然后转移至超净工作台内。
平衡离心：
将解冻后的细胞悬液与适量的预热培养基混合，使用离心机以3000r/min离心3分钟，平衡细胞。
制备细胞悬液：
记录复苏日期，观察细胞贴壁率和存活率，判断复苏是否成功。
注意事项：
以下是细胞复苏的主要步骤和注意事项：
准备阶段：
- 预热水浴锅至37℃。
- 准备无菌超净工作台，使用75%酒精擦拭并进行紫外线消毒。
- 摆放好所需的离心管、吸管、培养瓶等耗材和培养基。
- 从液氮罐中取出所需细胞的冻存管，操作时戴厚手套和护目镜。
- 尽量缩短暴露在室温的时间，避免细胞因温度上升受损。
- 将冻存管快速浸入预热至37℃的水浴中，不断摇动，确保在1-2分钟内完全融化。
- 融化过程中，避免冻存管底部接触水面，防止污染。
解冻后，用酒精棉球擦拭冻存管外壁，然后转移至超净工作台内。
平衡离心：
将解冻后的细胞悬液与适量的预热培养基混合，使用离心机以3000r/min离心3分钟，平衡细胞。
制备细胞悬液：
- 吸弃上清液，加入新鲜培养基，轻轻吹打制成细胞悬液。
- 根据细胞计数调整细胞浓度，通常以5×10^5/mL为宜。
- 将细胞悬液分装至培养瓶内，放入37℃、5% CO₂的培养箱中培养。
- 2-4小时后或24-48小时后更换新鲜培养基继续培养。
记录复苏日期，观察细胞贴壁率和存活率，判断复苏是否成功。
注意事项：
- 无菌操作：整个过程需在无菌条件下进行，避免污染。
- 快速融化：细胞融化速度要快，避免慢速融化导致冰晶再结晶损伤细胞。
- 避免DMSO毒性：对于敏感细胞，解冻后应通过离心去除DMSO，再接种至培养基中。
- 液氮操作安全：操作液氮时需戴防护眼镜和手套，避免冻伤。
- 运输保护：冻存细胞运输时应采取保冷措施，防止细胞提前融化。
- 复苏后换液：复苏后的第二天，观察细胞状态，如有较多未贴壁或死细胞，可考虑更换培养基。
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