在我国沿海的甲壳类养殖场，一种称为 “牛奶病” 的疫病正威胁着养殖户的生计。该疾病由Hematodinium属寄生甲藻所引发，专门侵袭三疣梭子蟹、锯缘青蟹等经济甲壳类，一旦爆发便会导致宿主器官功能衰竭、大规模死亡，给水产养殖业带来巨大损失。棘手的是，这种寄生甲藻有着复杂的生命周期，既能以微孢子形式通过水体传播，又能以滋养体形式在宿主体内大量繁殖。传统检测方法主要依赖专业人员对样本形态进行观察，操作复杂、灵敏度低，难以实现快速筛查和早期预警。如何精准、高效地捕捉这种“隐形杀手”，成为甲壳类养殖健康发展的关键。

文章题目为“Establishment of CARD-FISH and Dot-ELISA Assays for Diagnosis of the Parasitic Dinoflagellate Hematodinium perezi”于2025年6月发表在Journal of Fish Diseases杂志，作者来自于中国科学院海洋研究所海洋生态与环境重点实验室。

为了有效检测 Hematodinium的不同生命阶段，研究团队开发了两种检测方法 CARD-FISH 和 Dot-ELISA，分别针对其体外微孢子和体内滋养体。

CARD-FISH 检测方法：将含有大量微孢子的海水用多聚甲醛固定，并过滤到 0.2μm滤膜上，经琼脂包被、乙醇脱水、HCl处理等步骤制备样本，随后使用5'端标记辣根过氧化物酶（HRP）的寡核苷酸探针，在特定的杂交缓冲液中，35℃下杂交 8 小时，清洗后加入混有底物的发光液，用荧光显微镜观察结果，可清晰看到 Hematodinium微孢子的阳性信号。通过测试不同杂交时间，确定4小时为最佳时长；同时对多种藻类、细菌等进行检测，验证方法的特异性（如图 1、2）。

图1（左）.Hematodinium perezi血液菌小孢子的CARD-FISH检测。(A)杂交1h， (B)杂交2h， (C)杂交4h， (D)杂交8h.
图2（右）.CARD-FISH法检测特异性。(A) H. perezi小孢子，(B) 5种藻类（Prorocentrum minimum, P. micans, Alexandrium sp., Heterosigma akashiwo and Akashiwo sanguinea）的细胞样本，(C) 2种弧菌（副溶血性弧菌、harveyi弧菌）的细菌样本和(D)肝原肠胞虫的细菌样本.

Dot-ELISA 检测方法：识别宿主体内的滋养体，采用放射免疫沉淀法提取 Hematodinium寄生虫蛋白，与高通量抗体芯片孵育筛选特异性单克隆抗体，芯片由英国ArrayJet公司的Marathon（现Mecury系列）生物芯片点样仪制备，大约80, 000种单克隆抗体被点印在硝酸纤维素膜上，最终获得了能特异性识别 Hematodinium 滋养体的单克隆抗体HD6944。实验通过观察是否出现蓝紫色斑点判断是否感染，通过测试不同稀释比例的单克隆抗体，确定 1:2000为最佳稀释浓度；并对多种病原体进行检测，验证了方法的特异性（图3、4）。

图3（左）.单抗（HD6944）的最佳浓度用于Dot ELISA血液病检测。(A)健康的血淋巴；(B)轻度血液病感染的血淋巴，(C)重度血液病感染的血淋巴（阳性对照），(D)无菌ddH2O（空白对照）.
图4（右）.Dot-ELISA法的特异性验证。(A)健康血淋巴，(B)白斑综合征病毒，(C)感染性皮下和造血坏死病毒，(D)副溶血性弧菌，(E)哈维氏弧菌，(F)肝原肠胞虫，(G)血细胞滋养体，(H)无菌ddH2O（空白对照），(I)Prorocentrum minimum, (J) Prorocentrum micans, (K) Alexandrium sp., (L) akashiwo Heterosigma akashiwo sanguinea.

该研究成功建立的 CARD-FISH 和 Dot-ELISA 两种检测方法，填补了 Hematodinium不同生命阶段检测技术的空白。CARD-FISH可有效监测水体中的微孢子，为阻断传播路径提供了依据；Dot-ELISA 操作简便、结果直观，适合在养殖场等现场快速检测，能及时发现感染个体，有助于早期防控。同时为 Hematodinium 疫情的预防和控制提供了强有力的技术支持，有助于减少甲壳类养殖产业的经济损失，保障产业的健康可持续发展，对我国沿海地区的水产养殖具有重要的现实意义。

原文链接：https://doi.org/10.1111/jfd.70007

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