实验概要：
Langendorff 灌流系统是研究离体心脏电生理活动的经典技术。相较于在体心脏研究，该系统可排除神经、体液调节的干扰，具有影响因素少、可控性强的显著优势 —— 能够精准调控前负荷、后负荷、营养液成分、温度等关键实验条件。本文将围绕猪心脏 Langendorff 离体灌流实验，从前期准备、心脏获取与处理、离体灌流操作、多通道电生理标测记录及实验注意事项等方面展开详细阐述，以期为科研工作者提供清晰、实用的实验指导。

实验目的：
利用Langendorff离体心脏灌流技术维持猪心脏在离体状态下的正常生理活动；利用多通道电生理标测技术检测离体猪心脏ECG、场电位传导方向、传导速度、传导离散度等电生理指标。

实验动物：
巴马猪、成年猪、羊等大动物（本次分享为巴马猪、成年猪实验案例）

实验方法：
Langendorff离体心脏灌流技术、多通道电生理标测技术。

实验原理：
1、Langendorff离体心脏灌流技术原理：离体动物心脏在恒温恒压条件下，将心脏套管插入主动脉，逆行灌流含氧的灌注液，由冠状动脉灌流心肌，灌流液经冠状静脉窦从右心房、右心室、肺动脉端流出，以维持离体心脏在外界正常的生理活动。

2、多通道电生理标测技术原理：不同通道数的矩阵式记录电极紧密贴附在可兴奋样本表面，记录可兴奋样本电活动并将获得的信号输送至放大器，对信号进行采集。

Protocol（巴马猪实验案例）

一、实验前准备
（一）主要试剂：
肝素钠溶液、KH液、舒泰50、氯化钾溶液。
（二）主要器材：

玻璃皿、扎带、留置针、注射器、眼科镊、眼科剪、手术刀、止血钳、医用肋骨剪、大动物Langendorff 灌流系统、多通道电生理标测系统（配备笔状电极）等。

（三）主要溶液配方：
1、KH液

2、肝素钠溶液：生理盐水配制，1000 U/mL
3、氯化钾溶液：生理盐水配制，2M

二、猪心脏获取与处理
1、实验猪的体重：8~15kg，肌肉注射舒泰50（0.1mL/kg）。待实验猪麻醉后耳缘静脉注射肝素钠溶液（1000 U/kg），15 min后静脉注射2M氯化钾溶液（1mL/kg）处死。

2、将实验猪仰卧固定于实验台上，倒“T”形开胸，暴露心脏。提起肺叶，沿肺后部快速剪下心脏, 并置于预冷的KH液中。

3、迅速找到主动脉，剪去多余组织；在镊子辅助下迅速将主动脉连接到灌流针上，用扎带固定心脏，注入含氧（95％O₂，5％CO₂）KH液逆行灌注使心脏复跳。

三、Langendorff离体心脏灌流
1、将心脏转移至 Langendorff灌流系统，打开调试好的灌流系统开始灌流，进行后续实验。
灌流速率：40~60 mL/min，灌流温度：37±0.3 ℃。 

四、多通道电生理标测记录
1、心脏稳定 15 min后，将ECG电极放置在心脏的右心房与左心室，两个 64 通道笔式电极分别贴附到左右心房和左右心室，记录离体心脏自发节律下ECG、场电位传导方向、传导速度、传导离散度等电生理指标。
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Protocol（成年猪实验案例）

一、实验前准备
（一）主要试剂：
舒泰注射液、肝素钠溶液、灌注液等。
（二）主要器材：
胸骨凿、胸腔牵开器、洗心杯、采血桶、天平、测量尺、量筒、除颤仪、大动物Langendorff 灌流系统、64通道电生理标测系统（配备薄膜电极）等。
（三）主要溶液配方：
灌注液：克-亨氏液(500mL)+ 白蛋白(20% 白蛋白 200mL)+ 肝素化血液(1.5L血液 +20000IU 肝素钠)+多种维持心脏稳定状态的药物(肝素化血液为保证红细胞压积-Hct≥20%和血红蛋白浓度-cHg≥40g/L，要根据实验具体情况调整配比，保障供氧)。

二、猪心脏获取与处理
（一）称重与麻醉
1、实验猪的体重：90kg左右，计算麻醉用药量。
2、舒泰注射液 (规格：250mg/5ml，用量：0.05-0.1ml/kg 体重) 麻醉。
（二）肝素化、采血
1、经耳缘静脉注射肝素钠溶液 12500IU 对猪进行肝素化。
2、割断颈部血管(也可采用 8F 一次性使用导管鞘套装从股动脉采血)，采集血液至肝素化的采血桶内（100mL 冷的克-亨氏液和 12500IU 肝素钠溶液混合）。
（三）开胸取心脏
1、行中线胸骨切开术：手术刀沿中线切开最外层皮肤，分离肌肉组织直至找到剑状软骨，并用手术刀将其切除以暴露胸骨体。接着，使用长止血钳从胸骨体位置水平戳进胸腔，钝性分离心脏与胸腔壁，防止切胸骨时损伤心脏。锤击胸骨凿切开胸骨，使用胸骨牵张器暴露胸腔后，缓慢剪开心包膜以暴露心脏，为取心手术做准备。
2、离断主要血管，将心脏与肺叶一并摘取，放入含肝素的无菌低温 KH 液中，冲洗去除残留血液。剥离肺叶及多余组织，把心脏缩短主动脉至4cm，肺动脉至 3~3.5cm。
3、在镊子辅助下将主动脉通过丝线、扎带固定到灌流针上，然后使用注射器灌流（含氧温热KH液）心脏使心脏泵出残血及恢复跳动。

三、Langendorff离体心脏灌流
1、将心脏主动脉连接到主动脉插管上，并用手术缝合线系紧。打开调试好的灌流系统开始灌流，进行后续实验。

四、多通道电生理标测记录
1、将薄膜电极紧密贴附在心脏表面，利用多通道电生理标测系统对离体猪心脏心外膜的场电位传导方向、传导速度、传导离散度等电生理指标进行检测。
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五、注意事项
1、用去离子水冲洗系统（冷-热-冷），使系统保持洁净，并通过调节蠕动泵，使出液口达到相应的灌流速度；
2、KH液使用前需要提前充氧（ 95% O₂ +5% CO₂ ）饱和，使灌流液达到氧饱和状态；
3、排出灌流系统内空气，使灌流液充满整个管路；
4、打开循环水加热系统，调节循环水温度，使流出的灌流液温度为 37 ℃左右。