实验概要：
心脏电生理紊乱（如 QT 间期延长、早后除极等）是室性心律失常乃至猝死的重要诱因。传统研究模型存在诸多局限：离体心肌细胞失去整体组织结构，难以反映跨室壁电生理差异；在体动物模型则受神经体液调节干扰，难以精准解析局部电活动机制。

心室肌楔形组织块，是一种通过冠状动脉灌注离体心脏组织、保留心肌电活动特性的实验模型，可用于模拟生理或病理状态下的心脏电传导。作为心脏电生理研究的重要工具，它在揭示跨室壁复极离散与室性心律失常机制方面具有绝对优势，其应用涵盖药物安全性评价（如 QT 间期延长药物）、缺血再灌注保护策略优化及遗传性心律失常机制探索等方面，为临床防治提供关键实验依据。

实验目的：
利用Langendorff离体心脏灌流技术维持猪心脏、心室肌楔形组织块在离体状态下的正常生理活动；利用高分辨荧光标测技术检测心室肌楔形组织块动作电位时程、动作电位时程离散、传导速度、传导离散度、钙瞬变时程、钙瞬变时程离散、钙传导速度、传导离散度、ECG等电生理指标。

实验动物：
巴马猪、成年猪、羊等大动物（本次分享为巴马猪心脏心室肌楔形组织块实验案例）

实验方法：
Langendorff离体心脏灌流技术；高分辨荧光标测技术。

实验原理：
1、Langendorff离体心脏灌流技术原理：离体动物心脏在恒温恒流条件下，将心脏套管插入主动脉，逆行灌流含氧的灌注液，由冠状动脉灌流心肌，灌流液经冠状静脉窦从右心房、右心室、肺动脉端流出，以维持离体心脏在外界正常的生理活动。

2、高分辨荧光标测技术原理：在可兴奋样本上负载荧光染料，通过高速相机记录荧光变化来反应样本中电压或各种离子浓度的变化，可同步记录动作电位与钙信号等电生理指标的改变。

Protocol（心室肌楔形组织块的光标测实验案例）

一、实验前准备
（一）主要试剂：
肝素钠溶液、KH液、舒泰50、氯化钾溶液、高钾停搏液、Blebbistatin试剂、Pluronic F-127试剂、Rhod-2AM试剂、RH-237试剂等。

（二）主要器材：

血管夹、灌流针、眼科剪、眼科镊、显微镊、手术剪、注射器、手术缝线（6-0）等。

（三）主要溶液配方：
1、KH液

2、肝素钠溶液：生理盐水配制，1000 U/mL
3、氯化钾溶液：生理盐水配制，2M
4、高钾停搏液

二、巴马猪心脏心室肌楔形组织块模型的制备
（一）猪心脏获取与处理
1、实验猪的体重：8~15kg，肌肉注射舒泰50（0.1mL/kg）。待实验猪麻醉后耳缘静脉注射肝素钠溶液（1000 U/kg），15 min后静脉注射2M氯化钾溶液（1mL/kg）处死。

2、将实验猪仰卧固定于实验台上，倒“T”形开胸，暴露心脏。提起肺叶，沿肺后部快速剪下心脏，并置于预冷的KH液中。

3、迅速找到主动脉，剪去多余组织；在镊子辅助下迅速将主动脉连接到灌流针上，用扎带固定心脏，逆行灌注含氧（95％O₂，5％CO₂）KH液使心脏复跳，排出残血。

（二）心室肌楔形组织块Langendorff灌流
1、残血排尽后，将心脏转移至Langendorff灌流系统，待心脏状态稳定后（可应用多通道电生理标测技术进行电生理信号检测），灌注低温高钾停搏液（10mmol/L KCl）以减少损伤。

2、心脏停跳后，选取心脏冠状动脉分支较多的组织，修剪长约10-20mm、宽约5-10mm、厚约3-5mm 的心室肌楔型组织块，用灌流针固定组织块，置于含氧饱和（95％O₂，5％CO₂）KH液的恒温浴槽中，持续充氧灌注。

灌流速率：2-3 mL/min，灌流温度：37±0.5 ℃。

大动物心室肌楔形组织块光标测实验Protocol

心室肌楔形组织块转移至含氧饱和（95％O₂，5％CO₂）KH液的恒温浴槽