自配ELISA试剂盒需要的设备和材料盘点
2025-10-15 来源:本站 点击次数:33
自配ELISA试剂盒需准备基础实验设备、耗材及试剂三大类，核心设备包括酶标仪、移液器等，试剂需涵盖抗体、底物等关键组分。
一、核心设备与耗材清单：
1、移液系统
高精度移液器（0.5-10μL、2-20μL、20-200μL、200-1000μL量程）及对应枪头
多通道移液器（可选，提升效率）
2、温控与孵育设备
37℃恒温箱（带湿度控制更佳）
湿盒或湿巾（维持孵育湿度）
3、洗涤与检测设备
洗板机（12通道以上）或手动洗瓶
酶标仪（450nm波长检测）
4、基础耗材
96孔聚苯乙烯酶标板（包被或未包被）
封板膜、离心管（1.5mL/2mL）、EP管（梯度稀释用）
研磨珠/管（组织样本处理）。
二、试剂与样本处理材料：
1、抗原/抗体：根据实验目的选择特异性抗原或抗体。
2、酶标记抗体：常用的酶如HRP（辣根过氧化物酶）或AP（碱性磷酸酶）。
3、底物溶液：如TMB（四甲基联苯胺）或ABTS（2,2'-联氨-双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)）。
4、终止液：如硫酸终止TMB显色反应。
5、洗涤液：通常为PBS（磷酸盐缓冲液）或TBS（Tris缓冲液）。
6、样品稀释液：用于稀释样品，防止浓度过高导致的非线性效应。
7、标准品：用于建立标准曲线，确定样品的浓度。
8、阳性对照和阴性对照：用于验证实验的特异性和灵敏度。
9、封闭液：如BSA（牛血清白蛋白）或脱脂奶粉，用于封闭非特异性结合位点。
10、pH缓冲液：确保溶液的pH值在适宜范围内。
11、蛋白酶抑制剂：用于保护抗原的完整性，防止降解。
三、操作步骤：
1、制备工作液：根据实验方案配制包被液、封闭液、洗涤液、酶标记抗体工作液、底物溶液和终止液。
2、包被：将抗原或抗体溶液加入微孔板中，孵育过夜或按说明书要求的时间。
洗涤：用洗涤液彻底清洗微孔板，去除未结合的抗原或抗体。
3、封闭：加入封闭液，孵育一定时间，封闭非特异性结合位点。
4、洗涤：再次洗涤微孔板。
5、加样：分别加入标准品、样品和对照品，按实验设计进行稀释。
6、孵育：加入酶标记抗体，孵育一定时间。
7、洗涤：洗涤微孔板，去除未结合的酶标记抗体。
8、加底物：加入底物溶液，孵育一定时间，产生颜色反应。
9、终止反应：加入终止液，停止显色反应。
10、读取结果：使用酶标仪在指定波长下读取各孔的吸光度值，建立标准曲线，计算样品浓度。
四、注意事项：
1、设备优先级：酶标仪和移液器为必需设备，洗板机可提升效率但手动洗涤亦可替代。
2、试剂保存：抗体、底物等需低温保存（冰箱），避免反复冻融影响活性。
3、操作规范：实验前需预热仪器（如酶标仪预热半小时），加样时避免枪头接触孔底。
通过以上设备和材料的准备，可以进行ELISA试剂盒的自配和实验操作。
一、核心设备与耗材清单：
1、移液系统
高精度移液器（0.5-10μL、2-20μL、20-200μL、200-1000μL量程）及对应枪头
多通道移液器（可选，提升效率）
2、温控与孵育设备
37℃恒温箱（带湿度控制更佳）
湿盒或湿巾（维持孵育湿度）
3、洗涤与检测设备
洗板机（12通道以上）或手动洗瓶
酶标仪（450nm波长检测）
4、基础耗材
96孔聚苯乙烯酶标板（包被或未包被）
封板膜、离心管（1.5mL/2mL）、EP管（梯度稀释用）
研磨珠/管（组织样本处理）。
二、试剂与样本处理材料：
1、抗原/抗体：根据实验目的选择特异性抗原或抗体。
2、酶标记抗体：常用的酶如HRP（辣根过氧化物酶）或AP（碱性磷酸酶）。
3、底物溶液：如TMB（四甲基联苯胺）或ABTS（2,2'-联氨-双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)）。
4、终止液：如硫酸终止TMB显色反应。
5、洗涤液：通常为PBS（磷酸盐缓冲液）或TBS（Tris缓冲液）。
6、样品稀释液：用于稀释样品，防止浓度过高导致的非线性效应。
7、标准品：用于建立标准曲线，确定样品的浓度。
8、阳性对照和阴性对照：用于验证实验的特异性和灵敏度。
9、封闭液：如BSA（牛血清白蛋白）或脱脂奶粉，用于封闭非特异性结合位点。
10、pH缓冲液：确保溶液的pH值在适宜范围内。
11、蛋白酶抑制剂：用于保护抗原的完整性，防止降解。
三、操作步骤：
1、制备工作液：根据实验方案配制包被液、封闭液、洗涤液、酶标记抗体工作液、底物溶液和终止液。
2、包被：将抗原或抗体溶液加入微孔板中，孵育过夜或按说明书要求的时间。
洗涤：用洗涤液彻底清洗微孔板，去除未结合的抗原或抗体。
3、封闭：加入封闭液，孵育一定时间，封闭非特异性结合位点。
4、洗涤：再次洗涤微孔板。
5、加样：分别加入标准品、样品和对照品，按实验设计进行稀释。
6、孵育：加入酶标记抗体，孵育一定时间。
7、洗涤：洗涤微孔板，去除未结合的酶标记抗体。
8、加底物：加入底物溶液，孵育一定时间，产生颜色反应。
9、终止反应：加入终止液，停止显色反应。
10、读取结果：使用酶标仪在指定波长下读取各孔的吸光度值，建立标准曲线，计算样品浓度。
四、注意事项：
1、设备优先级：酶标仪和移液器为必需设备，洗板机可提升效率但手动洗涤亦可替代。
2、试剂保存：抗体、底物等需低温保存（冰箱），避免反复冻融影响活性。
3、操作规范：实验前需预热仪器（如酶标仪预热半小时），加样时避免枪头接触孔底。
通过以上设备和材料的准备，可以进行ELISA试剂盒的自配和实验操作。
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