放线菌酮WB、Cell Viability Assay、IF、RT-PCR实验参考文献汇总
2025-10-17 来源:本站 点击次数:30Cycloheximide 与真核细胞蛋白质合成过程中核糖体 60S 亚基的 E- 位点结合，阻断 eEF2 介导的核糖体易位过程并阻止新蛋白质的合成。Cycloheximide 可抑制铁死亡 (ferroptosis) 并抑制自噬 (autophagy)。
目录号: HY-12320；Cycloheximide
别名：放线菌酮; Actidione; Naramycin A（https://www.medchemexpress.cn/Cycloheximide.html）
CAS：66-81-9；
01
Cycloheximide 放线菌酮 WB实验参考文献
1、Signal Transduct Target Ther. 2024 Mar 8;9(1):63.
用CHX处理的CHRNA 5沉默或过表达ICC细胞中β-连环蛋白半衰期的基于WB的检测（2-12 h）。
2、Cell. 2024 Apr 25;187(9):2288-2304.e27.
环己酰亚胺（0.5μM）阻断 SLC6A6-KD CD8 + T 细胞中的整体蛋白质合成，包括 ATF4 的合成。
3、Circulation. 2024 May 28;149(22):1752-1769.
用 4-HNE 和 CHX（100μg/mL）处理的 mVSMC 中 Runx2 水平的蛋白质印迹分析长达 12 小时（n = 9）。
02
1、Cell. 2025 Feb 6;188(3):814-831.e21.
环己酰亚胺（10μM;12 小时）几乎完全阻断小鼠胚胎发育。
2、Circulation. 2024 May 28;149(22):1752-1769.
用 4-HNE 和 CHX（100μg/mL）处理的 mVSMC 中 Runx2 水平的蛋白质印迹分析长达 12 小时（n = 9）。
3、Mol Cancer. 2024 Jul 9;23(1):141.
蛋白质合成抑制剂环己酰亚胺（20μM）对 PFKP 耗尽的 LIU-LSC-1 细胞中 c-Myc 稳定性随时间推移的影响。蛋白质印迹（左）和半定量（右）对 PFKP 和 c-Myc 稳定性的蛋白质表达。
Cycloheximide 放线菌酮 IF实验参考文献
1、Nat Cell Biol. 2024 Jun;26(6):917-931.
在 3 h Tg 处理之前，将 HeLa 细胞预处理 1 小时环己酰亚胺（CHX，10 μg/mL）。IRE1α 簇（红色）和 G3BP1 阳性 SG（绿色）的代表性共聚焦 IF 图像。比例尺，10 μm。还显示了含有共定位 IRE1α-SG 簇的细胞百分比和 IRE1α-SG 簇指数的量化。
2、Nat Cell Biol. 2024 Jun;26(6):917-931.
IRE1α簇（红色）与 G3BP1（绿色）共定位在用二甲基亚砜（DMSO）对照（Ctrl），Tg（1μM，3 小时），SA（500μM，1 小时）或 HS（43°C，1 小时）处理的 HeLa 细胞中具有代表性的 IF 图像在没有或存在 CHX（10μg/mL）预处理的情况下。
Cycloheximide 放线菌酮RT-PCR实验参考文献
1、Drug Resist Updat. 2024 Jul 22:76:101120.
环己酰亚胺（200μg/mL;15 分钟）。使用 qRT-PCR 检测 CHX 处理的 AML（THP-1 和 HL-60）细胞中 BCL7A mRNA 的半衰期。
2、Nat Cell Biol. 2024 Jun;26(6):917-931.
在 3 h Tg 处理之前，将 HeLa 细胞预处理 1 小时环己酰亚胺（CHX，10 μg/mL）。代表性的琼脂糖凝胶显示 XBP1 mRNA 剪接水平的 RT-PCR 分析。
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05
体外研究(In Vitro)
Cycloheximide (200µM，2 或 10 分钟) 在体外抑制 eEF2 介导的 tRNA 易位[1]。
Cycloheximide (35 μM，1 或 4 小时) 抑制兔主动脉平滑肌细胞和 J774A.1 巨噬细胞新生蛋白合成[4]。
Cycloheximide (0.5-1 μg/mL，1-3 天) 抑制 C6 胶质瘤细胞增殖，诱导细胞周期阻滞在 G1 期和 S 期，促进 C6 胶质瘤细胞分化[5]。
注意事项:
1. 传代次数、细胞状态、细胞密度都可能会影响实验效果。需要调整细胞状态至较好时开展实验 (HCT 116 贴壁细胞形态较小，密度大时容易聚团，铺细胞尽量均匀)；
2. 不同细胞系对 Cycloheximide 敏感度不同，检测指标可能有差异，建议参考文献，提前做预实验 (摸索药物处理时间、浓度，抗体条件)，确定实验方案合理可行；
3. 药物现配现用，可超声加热助溶，直至溶液澄清透明; 首次实验用不完时需分装冻存 -20℃；
4. 检测指标 MDM2、c-Myc 蛋白出现双条带，可能是发生了翻译后修饰；
a. c-Myc存在多种翻译后修饰 (c-Myc 多个位点存在磷酸化修饰、乙酰化修饰、泛素化修饰、糖基化修饰)，常出现实际检测分子量与预测条带大小不符，或者两条条带现象[6]。
b. MDM 2 存在多个磷酸化位点，预测分子量为 55 kDa，但由于存在多种异构体和翻译后修饰，以及 p53 激活时对 MDM2 有剪切作用，实测分子量大小为 90 kDa，60 kDa，可能观察到多个条带[7]。
06
体内研究(In Vivo)
Cycloheximide (30、60 或 120 mg/kg, 在用 200 μA 电击训练之前注射）对小鼠记忆测试试验的潜伏期有显著影响 (P<0.001)。在盐水对照中，这种电击水平导致测试试验的延迟明显高于训练中的延迟。Cycloheximide (30 mg/kg，注射) 导致测试试验的潜伏期明显高于盐水对照组。接受较高剂量注射 Cycloheximide 的小鼠在测试试验中的潜伏期与盐水组相当，即在这些条件下较高剂量既不增强也不损害记忆，导致倒 U 型剂量反应曲线用于 Cycloheximide 增强记忆[2]。
Cycloheximide (200 mg/kg, 腹腔注射，KA 给药前 20 分钟) 在 Kainic acid (KA) (HY-N2309) 诱导的小鼠海马原代神经元中抑制细胞外信号调节蛋白激酶 (p-ERK)、c-Jun N-末端激酶 1 (p-JNK1) 和钙/钙调素依赖性蛋白激酶 II (p-CaMK II) 的磷酸化，以及 c-Fos 和 c-Jun 蛋白表达增加[8]。