一份优化的染料加载方案，是成功钙成像实验的基石。它不仅决定了信号强度，更关乎数据的信噪比与可重复性。无论您使用的是明星产品 Cal-520® AM，还是其多色伙伴 Cal-590™ AM 或 Cal-630™ AM，遵循以下方案，将助您获得卓越的成像效果，让实验事半功倍。

Cal-AM 系列染料优化加载方案

第一步：制备储备液
使用高质量无水DMSO，将Cal-520®/Cal-590™/Cal-630™ AM染料配制为 2-5 mM 的储备液。
关键提示：建议进行小体积分装，并避光保存于 -20°C，以避免反复冻融影响染料活性。

第二步：配制工作液
在实验当天，将储备液解冻至室温，然后用HHBS或您选择的细胞缓冲液稀释至 1-5 µM 的工作浓
度
不可或缺的助手：在工作液中加入 0.02% - 0.04% 的 Pluronic® F-127。
它的作用：增强染料的亲水性，防止其在缓冲液中形成胶束，确保染料均匀、高效地加载到细胞内。
便捷之选：AAT Bioquest 提供即用型 Pluronic® F-127 溶液，开瓶即用，省时省力。

第三步：抑制染料泄漏（针对特定细胞）
如果您的细胞（如CHO、HEK293等）表达有机阴离子转运体，强烈建议在染料工作液中加入 丙磺舒。
作用机制：有效抑制转运体活性，防止染料被“泵”出细胞，确保长时间实验中信号的稳定性。
工作浓度：使孔内终浓度达到 0.1-1 mM。
便捷之选：AAT Bioquest 提供多种 ReadiUse™ 丙磺舒产品（包括水溶性钠盐和稳定溶液），无需自行配制，简化流程。

第四步：加载与孵育
将配制好的染料工作液加入细胞板。
标准流程：在细胞培养箱（37°C, 5% CO₂）中孵育 30-90分钟。
进阶技巧：对于难转染或信号较弱的细胞系，可随后在室温下继续孵育 15-30分钟，此步骤有助于提高信噪比。若信号仍不理想，可尝试将总孵育时间延长至2小时以上。

第五步：清洗与检测
孵育完成后，使用预热的HHBS或含有阴离子转运抑制剂的缓冲液，轻柔地清洗细胞 1-2次，以彻底去除背景染料。
清洗后，加入新鲜缓冲液，即可上机检测。

光谱指南：
Cal-520® AM：Ex/Em = 490/525 nm（绿色）
Cal-590™ AM：Ex/Em = 540/590 nm（橙红色）
​Cal-630™ AM：Ex/Em = 600/640 nm（深红色）

为什么选择 Cal-AM 系列？
多色荧光，灵活搭配
Cal-520® AM（绿）：亮度极高，是大多数单色或多色应用的理想选择。
Cal-590™ AM（橙红）：有效避开细胞自发荧光，非常适合与GFP等多色标记实验。
Cal-630™ AM（深红）：组织穿透力强，适用于厚组织、深层成像或与其他红色探针联用。

卓越性能，超越传统
超高信噪比：荧光强度远超传统染料（如Fluo-4、Rhod-2），同时保持极低的背景。
快速动力学响应：能精准捕捉瞬时钙闪烁与振荡，还原最真实的钙信号动态。

优异的光稳定性：支持长时间活细胞成像，信号衰减慢，是发育生物学和药理学长期观测的可靠工具。

科学的进步，始于更清晰的观察。当您无需再与噪音和衰减纠缠，便能更专注于现象本身，更接近真理。让 Cal-AM 系列染料 成为您探索之路上最可靠的眼睛，见证下一个突破的诞生。