Filipin与CTxb-FITC助力破解阿尔茨海默病胆固醇代谢与脂筏病理机制
2026-02-26 来源:本站 点击次数:47当阿尔茨海默病（AD）研究聚焦于 APOE4 介导的神经免疫紊乱，当胆固醇堆积、脂筏异常成为破解病理机制的关键突破口，你是否在寻找能精准捕捉这些分子变化的实验工具？
近期《Translational Neurodegeneration》（IF:10.8）一篇题为“TRPV1 alleviates APOE4-dependent microglial antigen presentation and T cell infltration in Alzheimer’s disease”的重磅研究为 AD 机制带来新洞见：APOE4 通过 ER 应激 - Ca²⁺-SREBP2 通路诱发微胶质细胞胆固醇堆积，进而增强 MHC II 抗原呈递与 T 细胞浸润，而 TRPV1 agonist 可逆转这一病理过程。值得关注的是，这项研究的核心数据支撑，离不开Absin Filipin III（货号：abs42018484）与Absin CTxb-FITC（货号：abs80003）的精准助力 —— 这对 “探针组合”，正成为 AD 及神经退行性疾病研究的得力助手！
Filipin III：胆固醇代谢异常的 “可视化侦探”
在 AD 病理中，微胶质细胞的胆固醇堆积是触发免疫紊乱的 “导火索”。而 Filipin III 作为特异性胆固醇结合荧光探针，能让这一 “隐形” 病理变化清晰可见：
精准定位，直击核心：特异性结合细胞内游离胆固醇，通过蓝色荧光信号（激发/发射波长～355/460 nm）精准标记胆固醇分布，无论是 BV2 细胞内的弥散积累，还是溶酶体中的异常聚集，都能被清晰捕捉。
量化分析，数据可靠：在文献研究中，科研团队用 50μg/mL Filipin III 对 BV2 细胞染色 2 小时，结合 ImageJ 定量分析，明确证实 “APOE4+PHF 组胆固醇积累显著高于 APOE3 组，辣椒素干预后可逆转”，为 “胆固醇堆积是 APOE4 致 AD 的关键环节” 提供直接证据。
灵活兼容，场景广泛：可与溶酶体染料（如 LysoTracker Red）联合使用，观察胆固醇在亚细胞结构的定位；也适用于小鼠脑组织切片，助力体内外实验数据互证，全方位解析胆固醇代谢异常的病理意义。
Filipin III 与 LysoTracker Red 联合染色，观察溶酶体中胆固醇聚集情况
CTxb-FITC：脂筏与抗原呈递的 “定位导航仪”
脂筏作为细胞膜上的信号平台，其与 MHC II 分子的结合是抗原呈递的关键步骤。而CTxb-FITC（霍乱毒素B亚基偶联FITC），正是解锁这一机制的 “钥匙”：
靶向脂筏，精准标记：特异性结合脂筏上的 GM1 神经节苷脂，通过绿色荧光（激发/发射波长～495/519 nm）清晰勾勒脂质筏轮廓，为 MHC II 分子的定位分析提供 “坐标系统”。
共定位分析，揭示机制：在文献研究中，科研团队将 8μg/mL CTxb-FITC 与 MHC II-PE 抗体联合染色（4℃孵育 30 分钟），通过共聚焦显微镜观察到 “APOE4+PHF 组 MHC II 在脂质筏上的聚集显著增加，辣椒素可减少这一聚集”，直接证实 “APOE4 通过脂质筏调控 MHC II 抗原呈递” 的核心机制。
操作便捷，信号稳定：无需复杂预处理，固定后直接染色即可获得稳定荧光信号，且与免疫荧光实验流程兼容，轻松融入现有实验体系，助力快速获得高质量共定位数据。
ApoE4+PHF 处理及辣椒素干预后，BV2 细胞中 MHC II 在脂筏（CTxb-FITC 标记）上的分布变化
表1 Filipin III 与 CTxb-FITC 实验操作步骤对照表
| 核心作用 | 1. 特异性结合细胞内胆固醇，通过荧光信号可视化胆固醇分布 2. 定量分析细胞（如 BV2 细胞、小鼠脑微 glia）中胆固醇积累水平 3. 联合溶酶体染料（LysoTracker Red）观察胆固醇在溶酶体中的聚集情况 |
1. 特异性结合细胞膜脂质筏上的 GM1 神经节苷脂，标记脂质筏位置 2. 观察 MHC II 分子在脂质筏上的定位与聚集，探究抗原呈递机制 |
| 实验样本 | 1. 体外：BV2 小鼠微 glia 细胞系 2. 体内：小鼠脑组织切片（海马区） |
体外：BV2 小鼠微 glia 细胞系 |
| 关键处理步骤 | 1. 固定：4% 多聚甲醛室温固定20min（细胞样本） 2. 洗涤：PBS 洗涤3次，去除固定液 3. 染色：50μg/mL Filipin III（含 10% FBS 的 PBS 配置）室温孵育2h 4. 联合染色（若需）：先加 50nM LysoTracker Red 37℃避光孵育30min，洗涤后再进行 Filipin III 染色 5. 核染色：DAPI 室温孵育10min，标记细胞核 |
1. 固定：4% 多聚甲醛室温固定10min 2. 封闭：含 5% 牛血清白蛋白的 PBS 室温封闭 3. 染色：加入 8μg/mL CTxb-FITC + 2μg/ml MHC II-PE 抗体，4℃孵育 30 分钟 4. 核染色：DAPI 室温孵育 10 分钟，标记细胞核 |
| 成像与分析工具 | 1. 成像：TCS SP8 激光共聚焦显微镜（40× 或 63× 物镜） 2. 分析：ImageJ 软件量化荧光强度/阳性区域占比 |
1. 成像：TCS SP8 激光共聚焦显微镜（63×1.4 NA 物镜） 2. 分析：ImageJ 软件计算 MHC II与CTxb-FITC 的共定位系数 |
| 关键实验参数 | 1. 染液浓度：50μg/mL 2. 孵育时间：2h 3. 孵育温度：室温 4. 联合染料：LysoTracker Red（50nM，37℃孵育 30 分钟） |
1. 染液浓度：8μg/mL 2. 孵育时间：30min 3. 孵育温度：4℃ 4. 联合抗体：MHC II-PE（2μg/mL） |
| 实验结论支撑 | 1. 证明 APOE4 会导致微 glia 中胆固醇积累 2. 验证辣椒素可通过 TRPV1 抑制胆固醇合成，减少胆固醇积累 |
1. 证明 APOE4 会促进 MHC II 在脂质筏上聚集 2. 验证辣椒素可降低 MHC II 在脂质筏的定位，抑制抗原呈递 |
当 AD 研究进入 “分子机制精细化” 时代，精准的实验工具是突破瓶颈的关键。Absin Filipin III (abs42018484)与 CTxb-FITC(abs80003)，已通过高分文献验证，为胆固醇代谢、脂筏功能研究提供 “可视化 + 定量化” 解决方案。
引用文献：
[1]Transl Neurodegener. 2024 Oct 29;13(1):52. doi: 10.1186/s40035-024-00445-6. PMID: 39468688 IF:10.8
[2]Gastroenterology. 2025 Sep;169(4):615-631.e32. doi: 10.1053/j.gastro.2025.03.019. Epub 2025 Mar 28. PMID: 40158738 IF:25.7
[3]Autophagy. 2025 Jun;21(6):1263-1282. doi: 10.1080/15548627.2025.2469129. Epub 2025 Mar 10. PMID: 39988734 IF:14.6
[4] Redox Biol. 2025 Feb:79:103469. doi: 10.1016/j.redox.2024.103469.Epub 2024 Dec 12.PMID: 39700693 IF:10.7
[5]TAntiviral Res. 2023 Aug:216:105662. doi: 10.1016/j.antiviral.2023.105662. Epub 2023 Jun 29. PMID: 37393054 IF:7.6
[6]J Transl Med. 2023 Oct 17;21(1):733. doi: 10.1186/s12967-023-04609-2. PMID: 37848983 IF:7.4
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| 货号 | 产品名称 | 规格 |
| abs42018484 | 菲律平 | 1mg |
| abs80003 | CTxB-FITC | 1mg |
| abs47038871 | 溶酶体红色荧光探针（FluoLyso Red） | 50μL×10 |
| abs47038872 | 溶酶体深红色荧光探针（FluoLyso Deep Red） | 50μL×10 |
| abs47038870 | 溶酶体绿色荧光探针（FluoLyso Green） | 50μL×10 |
| abs45128173 | Amyloid β-Peptide (1-42) (human) | 5 mg |
| abs44056601 | Amyloid β-Peptide (1-40) (human) | 5 mg |
| abs45151799 | Amyloid β-Protein (25-35) | 5 mg |
| abs817025 | 辣椒素 | 50 mg |
| abs9157 | 牛血清白蛋白 | 100 g |
| abs42016321 | DAPI | 10 mg |
| abs972 | 胎牛血清（优级） | 500 mL |
| abs1850211 | APC Rat anti-Mouse MHC Class II Antibody(NIMR-4) | 100T |