细胞解冻是生命科学和医学领域中的关键步骤。确保冷冻细胞温和解冻对于保持其活力和功能至关重要。

细胞的冷冻和解冻过程都会直接影响细胞复苏后的回收率和细胞活力，这是细胞培养中两个重要的质量方面。无论处理原代细胞、细胞系还是干细胞，遵循正确的步骤以确保解冻成功都是至关重要的。

随着细胞治疗与相关医疗技术的开发，大规模的细胞过程处理操作是必不可少的。然而，更多研究表明大规模的细胞培养与相关冻存操作需格外注意，然而，同源自体细胞，它不能直接用于治疗，而需要诱导培养操作。因此，由捐赠者提供的细胞同源异体细胞（ES细胞、iPS细胞）受到了更广泛的关注。通过从捐赠者身上预先收集并扩增培养细胞，这些细胞就能更快地用于治疗。与此同时，我们用CryoMACS冻存袋和ThawSTAR CB进行相关测试。

准备实验：

▶ [细胞来源] 无差别的人源iPS细胞

▶ [分装体积] 70mL细胞悬液

▶ [细胞密度] 5x106 个/mL

▶[冻存液] STEM-CELLBANER®

▶[冻存时间] 大约1.5个月

▶[冻存袋] CryoMACS Freezing Bag 250mL

测试结果:

▶ [解冻时间] 30min.(47个2mL冻存管解冻时间共计90min)

▶[解冻活率] 95.5%

▶[解冻后细胞传代扩增] 原代细胞0.1x106个细胞，培养4天

250mL冻存袋传代2.55次，标定冻存管：2.49次，47个2mL冻存管：1.85次

●结论：通过细胞冻存袋实现大剂量的细胞冷冻与解冻，提高了工作效率，减少了细胞凋亡的风险。

实验：在本次实验中，我们两次冷冻、与解冻细胞，这些细胞来自人源iPS诱导培养。

▶ [细胞来源] 心肌细胞来源于人源iPS细胞，这些细胞在15~17天诱导分化后被收集。

▶ [分装体积] 20mL细胞悬液

▶ [细胞密度] 5x106 个/mL

▶[冻存时间] 在-150℃条件下1~2周

▶[冻存袋] CryoMACS Freezing Bag 50mL （50mL的冻存袋相当于14个2mL的冻存管细胞装量，细胞悬液总体积21mL）

工作时间和解冻后活率

*14个冻存管（总液体体积:21mL）按照以上步骤，累计用时超过1小时，活率94%

*50mL冻存袋（液体总量:20mL）第一次测试，累计用时20分钟左右，活率91%

*50mL冻存袋（液体总量:20mL）第二次测试，累计用时20分钟左右，活率91.5%

▶培养后评估：

解冻后进行贴壁培养

结论：50mL袋装细胞的贴壁情况与14个冻存管的细胞相当。

通过索尼SI8000流式细胞分析：在解冻后进行的6天贴壁培养之后数据如下：