Elisa实验中的主要加样技巧汇总
2025-11-19 来源:本站 点击次数:169
ELISA加样是实验中的关键步骤，直接影响结果的准确性和重复性。以下是主要的加样技巧：
一、加样角度
正确的加样方法应为45度角，吸头贴着孔壁加入，避免液体残留在孔壁上或吸头上。
角度太小会导致液体残留在孔壁上；吸头应贴着管壁和液面的交界处。
二、加样顺序一致
每次加样顺序应保持一致，特别是底物和终止液的顺序，以保证每个孔显色时间相同。
三、加样量准确
加样时应将液体加在孔底，避免加在孔壁上部，且注意不可溅出或产生气泡。
单孔加样量一般要求≥50μl/指标，如需复孔则≥100μl/指标。
四、避免气泡
加样时应避免产生气泡，因为气泡会影响孔内反应的均一性。
如果板内有气泡，可以考虑用空枪将其吸出，但要注意不能碰到底板。
五、使用排枪
尽量使用排枪进行加样，以确保加样的一致性和准确性。
同时做好笔记，一次完成操作，避免重复操作。
六、利用视觉辅助
用一张写满字的纸垫在酶标板下，加过样本的孔会使下面的字变小，未加的则不变，方便区分。
常见错误与避免方法
加样量不准：未校准移液器或吸头质量差会导致体积误差，需定期校准并使用密封性好的吸头。
液体溅出或气泡：加样时需垂直悬空，避免触及孔壁；若溅出需用吸水纸吸干并记录。
时间差影响：全自动加样仪加样时间差建议控制在10分钟内，超过15分钟可能导致HBsAg、抗-HCV等项目结果显著偏差。
优化建议
自动化设备：使用自动加样机联合洗板机可提高精密度，减少人为误差。
震荡孵育：加样后震荡孵育（如300转/分钟）可加速抗原抗体结合，提高反应效率
通过规范操作和细节控制，可显著提升ELISA加样的准确性和重复性。
一、加样角度
正确的加样方法应为45度角，吸头贴着孔壁加入，避免液体残留在孔壁上或吸头上。
角度太小会导致液体残留在孔壁上；吸头应贴着管壁和液面的交界处。
二、加样顺序一致
每次加样顺序应保持一致，特别是底物和终止液的顺序，以保证每个孔显色时间相同。
三、加样量准确
加样时应将液体加在孔底，避免加在孔壁上部，且注意不可溅出或产生气泡。
单孔加样量一般要求≥50μl/指标，如需复孔则≥100μl/指标。
四、避免气泡
加样时应避免产生气泡，因为气泡会影响孔内反应的均一性。
如果板内有气泡，可以考虑用空枪将其吸出，但要注意不能碰到底板。
五、使用排枪
尽量使用排枪进行加样，以确保加样的一致性和准确性。
同时做好笔记，一次完成操作，避免重复操作。
六、利用视觉辅助
用一张写满字的纸垫在酶标板下，加过样本的孔会使下面的字变小，未加的则不变，方便区分。
常见错误与避免方法
加样量不准：未校准移液器或吸头质量差会导致体积误差，需定期校准并使用密封性好的吸头。
液体溅出或气泡：加样时需垂直悬空，避免触及孔壁；若溅出需用吸水纸吸干并记录。
时间差影响：全自动加样仪加样时间差建议控制在10分钟内，超过15分钟可能导致HBsAg、抗-HCV等项目结果显著偏差。
优化建议
自动化设备：使用自动加样机联合洗板机可提高精密度，减少人为误差。
震荡孵育：加样后震荡孵育（如300转/分钟）可加速抗原抗体结合，提高反应效率
通过规范操作和细节控制，可显著提升ELISA加样的准确性和重复性。
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