ELISA试剂盒的常见干扰物介绍
2025-12-03 来源:本站 点击次数:63
ELISA（酶联免疫吸附试验）是一种高灵敏度的检测技术，广泛用于抗原、抗体或细胞因子的定量分析。然而，样本中的干扰物质可能影响抗原-抗体特异性结合，造成假阳性、假阴性或结果偏移。干扰物主要分为内源性（来自机体自身）和外源性（采样或保存不当引入）两类。常见的干扰物质包括：
一、内源性干扰物质：
1、类风湿因子（RF）：血清中IgM、IgG型类风湿因子可以与ELISA系统中的捕获抗体及酶标记二抗的Fc段直接结合，导致假阳性。解决方法包括使用F(ab')2替代完整IgG，或在标本稀释液中加入热变性IgG，以及加入2-Hydroxy-1-ethanethiol降解RF。
2、补体：固相一抗和标记二抗过程中，抗体分子变构暴露Fc段的补体C1q结合位点，使C1q连接二者，造成假阳性。解决办法是用EDTA稀释标本，或通过热灭活补体（53℃ 10min或56℃ 30min）。
3、嗜异性抗体：人类血清中的天然嗜异性抗体能与啮齿类动物Ig结合，连接ELISA系统中的一抗和二抗，引起假阳性。可在标本稀释液中加入过量动物Ig以中和。
4、嗜靶抗原的自身抗体：抗甲状腺球蛋白、抗胰岛素等自身抗体可能与靶抗原结合形成复合物，干扰抗原抗体测定结果。需在测定前用理化方法解离复合物。
5、医源性诱导的抗鼠Ig抗体：由于使用鼠源性抗体治疗或诊断，某些病人可能体内产生抗鼠抗体，干扰ELISA检测。
二、外源性干扰物质
1、标本溶血
红细胞释放的亚铁血红素具有类过氧化物酶活性，催化底物显色(假阳性)。严重溶血样本应弃用。
2、细菌污染
细菌内源性酶(如辣根过氧化物酶)可催化底物产生非特异性显色。
3、标本处理不当
抗凝不完全导致纤维蛋白残留，洗涤不彻底时酶残留引起假阳性。
4、抗凝剂干扰
肝素抗凝血浆增加OD值，EDTA或NaN₃抑制辣根过氧化物酶活性。
三、其他干扰因素
1、疾病与年龄因素
类风湿关节炎、红斑狼疮等疾病患者的嗜异性抗体，或老年人异常蛋白质均可干扰结果。
2、操作因素
加样误差、洗板不充分等亦可引入干扰。
四、预防策略：
1、样本采集时避免溶血、脂浊；
2、使用专用样本稀释液或添加阻断剂；
3、必要时对样本进行预处理（如热变性、过滤）；
4、设置合理的阴阳性对照和空白孔监控实验质量。
了解并控制这些干扰物质是确保ELISA检测结果准确性的关键。
一、内源性干扰物质：
1、类风湿因子（RF）：血清中IgM、IgG型类风湿因子可以与ELISA系统中的捕获抗体及酶标记二抗的Fc段直接结合，导致假阳性。解决方法包括使用F(ab')2替代完整IgG，或在标本稀释液中加入热变性IgG，以及加入2-Hydroxy-1-ethanethiol降解RF。
2、补体：固相一抗和标记二抗过程中，抗体分子变构暴露Fc段的补体C1q结合位点，使C1q连接二者，造成假阳性。解决办法是用EDTA稀释标本，或通过热灭活补体（53℃ 10min或56℃ 30min）。
3、嗜异性抗体：人类血清中的天然嗜异性抗体能与啮齿类动物Ig结合，连接ELISA系统中的一抗和二抗，引起假阳性。可在标本稀释液中加入过量动物Ig以中和。
4、嗜靶抗原的自身抗体：抗甲状腺球蛋白、抗胰岛素等自身抗体可能与靶抗原结合形成复合物，干扰抗原抗体测定结果。需在测定前用理化方法解离复合物。
5、医源性诱导的抗鼠Ig抗体：由于使用鼠源性抗体治疗或诊断，某些病人可能体内产生抗鼠抗体，干扰ELISA检测。
二、外源性干扰物质
1、标本溶血
红细胞释放的亚铁血红素具有类过氧化物酶活性，催化底物显色(假阳性)。严重溶血样本应弃用。
2、细菌污染
细菌内源性酶(如辣根过氧化物酶)可催化底物产生非特异性显色。
3、标本处理不当
抗凝不完全导致纤维蛋白残留，洗涤不彻底时酶残留引起假阳性。
4、抗凝剂干扰
肝素抗凝血浆增加OD值，EDTA或NaN₃抑制辣根过氧化物酶活性。
三、其他干扰因素
1、疾病与年龄因素
类风湿关节炎、红斑狼疮等疾病患者的嗜异性抗体，或老年人异常蛋白质均可干扰结果。
2、操作因素
加样误差、洗板不充分等亦可引入干扰。
四、预防策略：
1、样本采集时避免溶血、脂浊；
2、使用专用样本稀释液或添加阻断剂；
3、必要时对样本进行预处理（如热变性、过滤）；
4、设置合理的阴阳性对照和空白孔监控实验质量。
了解并控制这些干扰物质是确保ELISA检测结果准确性的关键。
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