PCR实验室污染后的应急处理方法步骤介绍
2025-12-03 来源:本站 点击次数:59
PCR实验室污染后的应急处理方法主要包括以下几个步骤：
一、样本溢出污染处理：
1. 吸水纸覆盖，倾倒10%次氯酸消毒剂静置30分钟
2. 75%酒精喷洒后紫外照射1小时。
二、气溶胶污染污染处理：
消毒：用1000mg/L次氯酸消毒液喷雾操作区，关闭门窗后开启紫外灯照射4小时以上。
设备处理：移液枪前端用2000mg/L次氯酸擦拭，生物安全柜更换过滤网。
三、质粒/产物污染
器具处理：离心管架、吸嘴盒等用500mg/L次氯酸浸泡2小时，清水冲洗后紫外照射。
表面清洁：实验台面用1mol/L盐酸擦拭降解DNA残留。
四、样本交叉污染
环境消毒：地板、墙面用500mg/L次氯酸全面清洁，通风系统切换至外循环模式。
验证标准：连续3天阴性对照无扩增且空白样本检测阴性后恢复实验。
五、反应液污染处理：
使用DNase I法：在PCR混合液中加入0.5U DNase I，室温反应30分钟后加热灭活，再加入模板和Taq聚合酶进行扩增。
尿嘧啶糖苷酶（UNG）法：用dUTP代替dTTP，PCR产物中掺入大量dU，用UNG处理消除污染，UNG在PCR循环变性步骤中会被灭活，不影响新的PCR产物。
通用应急处理流程
1、暂停实验并溯源
立即停止所有操作，通过阴性对照排查污染范围（如试剂、设备或环境）。
重点检查扩增产物是否泄漏、样本是否交叉污染。
2、分区域清洁消毒
工作台/地面：用1:200稀释的LabClean（50ml加10L水）擦拭，敏感表面需先局部测试。
生物安全柜：更换过滤器，75%酒精擦拭后紫外照射30分钟616。
3、验证污染消除
使用新试剂和无污染耗材，连续3次检测阴性对照均为阴性，方可恢复实验。
预防措施：
1、设立阴阳性对照，帮助监测反应体系各成分的污染情况。
2、实验操作时戴合适的手套，避免直接接触PCR管口。
3、使用一次性手套和耗材，实验结束后妥善处理。
4、加试剂时尽量一次性完成，避免多次抽吸产生气溶胶。
5、试剂分装使用，减少反复冻融和取样的次数。
6、保持实验室清洁，定期进行环境消毒。
7、遵循分区操作原则，避免不同实验区的交叉污染。
这些措施旨在迅速控制和消除PCR污染，确保实验结果的准确性和可靠性。
一、样本溢出污染处理：
1. 吸水纸覆盖，倾倒10%次氯酸消毒剂静置30分钟
2. 75%酒精喷洒后紫外照射1小时。
二、气溶胶污染污染处理：
消毒：用1000mg/L次氯酸消毒液喷雾操作区，关闭门窗后开启紫外灯照射4小时以上。
设备处理：移液枪前端用2000mg/L次氯酸擦拭，生物安全柜更换过滤网。
三、质粒/产物污染
器具处理：离心管架、吸嘴盒等用500mg/L次氯酸浸泡2小时，清水冲洗后紫外照射。
表面清洁：实验台面用1mol/L盐酸擦拭降解DNA残留。
四、样本交叉污染
环境消毒：地板、墙面用500mg/L次氯酸全面清洁，通风系统切换至外循环模式。
验证标准：连续3天阴性对照无扩增且空白样本检测阴性后恢复实验。
五、反应液污染处理：
使用DNase I法：在PCR混合液中加入0.5U DNase I，室温反应30分钟后加热灭活，再加入模板和Taq聚合酶进行扩增。
尿嘧啶糖苷酶（UNG）法：用dUTP代替dTTP，PCR产物中掺入大量dU，用UNG处理消除污染，UNG在PCR循环变性步骤中会被灭活，不影响新的PCR产物。
通用应急处理流程
1、暂停实验并溯源
立即停止所有操作，通过阴性对照排查污染范围（如试剂、设备或环境）。
重点检查扩增产物是否泄漏、样本是否交叉污染。
2、分区域清洁消毒
工作台/地面：用1:200稀释的LabClean（50ml加10L水）擦拭，敏感表面需先局部测试。
生物安全柜：更换过滤器，75%酒精擦拭后紫外照射30分钟616。
3、验证污染消除
使用新试剂和无污染耗材，连续3次检测阴性对照均为阴性，方可恢复实验。
预防措施：
1、设立阴阳性对照，帮助监测反应体系各成分的污染情况。
2、实验操作时戴合适的手套，避免直接接触PCR管口。
3、使用一次性手套和耗材，实验结束后妥善处理。
4、加试剂时尽量一次性完成，避免多次抽吸产生气溶胶。
5、试剂分装使用，减少反复冻融和取样的次数。
6、保持实验室清洁，定期进行环境消毒。
7、遵循分区操作原则，避免不同实验区的交叉污染。
这些措施旨在迅速控制和消除PCR污染，确保实验结果的准确性和可靠性。
相关文章
更多 >