什么是肿瘤微环境？
肿瘤微环境是肿瘤生长的“土壤”，由肿瘤细胞、免疫细胞、成纤维细胞、血管内皮细胞等组成。它不仅影响肿瘤的侵袭和转移，还决定免疫系统是否能“认出”并攻击癌细胞。然而，传统显微镜下的单色染色难以捕捉TME的复杂性。直到mIHC的出现，才让科学家得以“一网打尽”TME中的关键角色。

1、肿瘤细胞
• 标志物：Pan-CK（细胞角蛋白），用于识别肿瘤细胞本身，是常用的上皮细胞标志物。
• 功能：作为肿瘤微环境的核心，肿瘤细胞通过分泌因子（如生长因子、趋化因子）调控周围细胞行为。

2、间质细胞
• 血管内皮细胞：CD31、VE-cadherin（内皮细胞标志物），内皮细胞通过形成血管网络为肿瘤提供氧气和营养，参与肿瘤血管生成。
• 成纤维细胞（CAFs） ：α-SMA（α-平滑肌肌动蛋白）、FAP（脂肪酸合酶），CAFs通过分泌细胞外基质（ECM）成分（如胶原蛋白、纤维连接蛋白）和多种生长因子（如TGF-β、HGF），为肿瘤细胞提供支持性微环境，并促进血管生成和免疫抑制。

3、免疫细胞
• 巨噬细胞（TAMs）
- M1型（抗肿瘤） ：CD86+/CD163-，分泌TNF-α、iNOS等
- M2型（促肿瘤） ：CD86-/CD163+，分泌Arginase、IL-10等。

• 中性粒细胞：CD16+、CD66b+，参与炎症反应和肿瘤浸润。
• 树突状细胞：CD11c+、HLA-DR+，介导抗原呈递和免疫激活

• T细胞
- 细胞毒性T细胞（CD8+） ：CD8+、Granzyme+、Perforin，直接杀伤肿瘤细胞。
- 调节性T细胞（Tregs） ：CD3+、CD4+、Foxp3+，抑制抗肿瘤免疫。

• B细胞：CD20/CD19、浆细胞CD138，参与体液免疫。
• 自然杀伤细胞（NK） ：CD56+，通过ADCC机制杀伤肿瘤细胞。

4、免疫检查点分子
• PD-1/PD-L1：评估免疫抑制状态，常与CD8+ T细胞共染。
• TIM-3、LAG3：与T细胞耗竭相关，用于区分“热”和“冷”肿瘤微环境。

5、空间分布与相互作用
• 免疫细胞亚群定位：通过CD8+、CD3+、CD45等标记物区分瘤内（intratumoral）和瘤周（peritumoral）区域。
• 细胞间串扰：分析巨噬细胞、T细胞、CAFs等的共定位和功能关联。

技术优势
mIHC技术通过多色荧光染色（如TSA放大技术）实现定性、定量和定位分析，能够同时检测多个标志物，揭示细胞间的空间关系和功能状态。例如，在胰腺癌研究中，mIHC可同时检测CD68（巨噬细胞）、CD163（M2型标志物）、PanCK（肿瘤细胞）等，而在肺癌中则关注CD8+ T细胞、PD-L1、Treg等。

应用场景
• 肿瘤预后评估：通过免疫细胞密度和亚型分析（如T细胞浸润、Treg比例）预测患者生存率。
• 免疫治疗靶点验证：检测PD-1/PD-L1表达与免疫检查点抑制剂疗效的相关性。
• 肿瘤异质性研究：解析不同肿瘤区域（如缺氧区、坏死区）的细胞组成差异。

未来展望：从“战场”到“战场指挥官”
随着mIHC技术的不断优化，科学家正尝试将其与空间转录组学、单细胞测序等技术结合，构建更精细的TME图谱。未来，或许我们能通过“定制化”分析，为每位患者制定个性化的免疫治疗方案——让免疫系统真正成为对抗癌症的“王牌”。