PCR温度循环仪标准操作规范分析
2025-12-18 来源:本站 点击次数:54
PCR温度循环仪（也称基因扩增仪）通过精确控制温度变化，实现DNA的变性、退火和延伸，完成目标片段的指数级扩增。其性能直接影响实验的成败。不正确的使用或维护会导致温度偏差、仪器损坏或结果不可重复。因此，遵循标准操作流程和注意事项至关重要。
操作与使用规范
1、开机自检：开机后等待仪器完成自检（SelfTest），屏幕显示“Ready”状态后再进行后续操作。
2、程序设置：
先设定热盖（Lid）温度，通常比最高变性温度高5–10°C（如变性95°C，热盖设为105°C），防止样品蒸发。
按顺序设置变性、退火、延伸的温度与时间，并确认循环总数。
使用梯度PCR仪时，可一次性测试多个退火温度，快速筛选最优条件。
3、运行程序：
将反应管平稳放入样品孔，确保盖紧。
选择已设定的程序，点击“Start”开始运行。
运行结束后，待风机停止再取出样品并关机。
4、安全收尾：
程序结束建议设置最后一步为16°C保温，便于取样。
实验完成后及时关闭电源，避免热盖长期工作导致损坏。
维护与保养要点
1、清洁：
定期用95%乙醇清洁样品台和热盖，去除残留物。
对于底部光学检测的荧光定量PCR仪，可用橡胶风球吹去灰尘，必要时用无水酒精棉签轻拭，避免液体进入光路系统。
2、预热与存放：
建议实验前预热2分钟，有助于延长仪器寿命。
长期不用时，应至少每半个月开机自检并运行20分钟，防止元件老化。
3、环境要求：
安置于湿度低、无尘、远离水源/热源/强磁场的地方，环境温度保持在18–35°C。
仪器间保持50cm以上距离，减少相互干扰。
关键性能校准与监控
PCR仪的核心是精准的温度控制，需定期验证以下指标：
特别说明：这些性能指标可通过专用温度验证系统进行校准，以确保符合JJF1527-2015等规范要求。
建议
为保障PCR实验的可靠性，必须做到：①.每次使用前检查程序设置是否正确；②.定期清洁仪器并监控运行状态；③.至少每半年进行一次专业的温度校准检测。若发现扩增效率下降或结果异常，优先排查温度控制系统是否正常。
操作与使用规范
1、开机自检：开机后等待仪器完成自检（SelfTest），屏幕显示“Ready”状态后再进行后续操作。
2、程序设置：
先设定热盖（Lid）温度，通常比最高变性温度高5–10°C（如变性95°C，热盖设为105°C），防止样品蒸发。
按顺序设置变性、退火、延伸的温度与时间，并确认循环总数。
使用梯度PCR仪时，可一次性测试多个退火温度，快速筛选最优条件。
3、运行程序：
将反应管平稳放入样品孔，确保盖紧。
选择已设定的程序，点击“Start”开始运行。
运行结束后，待风机停止再取出样品并关机。
4、安全收尾：
程序结束建议设置最后一步为16°C保温，便于取样。
实验完成后及时关闭电源，避免热盖长期工作导致损坏。
维护与保养要点
1、清洁：
定期用95%乙醇清洁样品台和热盖，去除残留物。
对于底部光学检测的荧光定量PCR仪，可用橡胶风球吹去灰尘，必要时用无水酒精棉签轻拭，避免液体进入光路系统。
2、预热与存放：
建议实验前预热2分钟，有助于延长仪器寿命。
长期不用时，应至少每半个月开机自检并运行20分钟，防止元件老化。
3、环境要求：
安置于湿度低、无尘、远离水源/热源/强磁场的地方，环境温度保持在18–35°C。
仪器间保持50cm以上距离，减少相互干扰。
关键性能校准与监控
PCR仪的核心是精准的温度控制，需定期验证以下指标：
| 校准项目 | 重要性说明 | 常见标准/问题阈值 |
| 温度准确性 | 温度偏差大易导致非特异性扩增或失败 | 企业标准通常为±0.5°C，优质产品可达±0.3°C |
| 温场均匀性 | 孔间温差影响重复性，边缘常偏低 | 企业标准通常为±0.5°C，优质产品可达±0.3°C |
| 升降温速率 | 影响PCR总时长与效率 | 一般要求≥3°C/sec；若降温超60秒需检查制冷系统 |
| 最大超调温度 | 温度过冲可能损伤酶活性或模板 | 需监控并记录，过大时需校准 |
特别说明：这些性能指标可通过专用温度验证系统进行校准，以确保符合JJF1527-2015等规范要求。
建议
为保障PCR实验的可靠性，必须做到：①.每次使用前检查程序设置是否正确；②.定期清洁仪器并监控运行状态；③.至少每半年进行一次专业的温度校准检测。若发现扩增效率下降或结果异常，优先排查温度控制系统是否正常。
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