防止PCR污染的防控策略与具体措施
2025-12-18 来源:本站 点击次数:53
PCR实验因高灵敏性和强扩增能力，极易受到微量核酸污染，导致假阳性结果。污染主要来源于四个方面：标本间交叉污染、PCR试剂污染、PCR扩增产物污染（最常见）以及克隆质粒污染。其中，气溶胶污染因操作中开盖、吸样等动作产生，携带大量DNA片段（单个颗粒可达48000拷贝），是防控重点。
防控策略与具体措施
以下为综合多项指南的防污染核心措施：
注意：若已发生污染，应立即暂停实验，全面清洁（更换试剂、消毒设备），严重时可采用“通风静置”法让污染物自然沉降稀释。移液器内部污染较难清除，建议专用或定期更换
建议
首选预防：通过合理分区、单向流程和人员培训从源头降低风险。
日常维护：定期使用安全高效的核酸去除剂（如非致癌性的LabClean）进行环境清洁。
技术升级：采用封闭检测的荧光定量PCR和UNG防污染系统，显著提升结果可靠性。
防控策略与具体措施
以下为综合多项指南的防污染核心措施：
| 措施类别 | 具体做法 | 目的/作用 |
| 空间控制 | 设置独立四区：试剂准备区、标本制备区、核酸扩增区、产物分析区；各区独立通风，空气从低污染风险区流向高风险区 | 物理隔离污染源，防止交叉 |
| 人流物流管理 | 人员、器材、试剂单向流动（试剂准备→标本制备→扩增→分析）；各区域使用不同颜色工作服和专用设备 | 避免物品携带污染扩散 |
| 试剂与耗材管理 | 试剂分装成小包装；使用带滤芯吸头；PCR用水为高压双蒸水 | 减少重复取用污染风险 |
| 实验操作规范 | 动作轻柔，慢吸慢放；开盖前离心；避免剧烈震荡；最后加入模板 | 减少气溶胶生成 |
| 化学去污染 | 使用商品化DNA去除剂（如LabClean、PCRClean）喷雾或湿巾清洁台面、仪器；推荐每周使用一次 | 快速降解残留DNA/RNA |
| 物理去污染 | 紫外线照射（254/300nm，30分钟）；注意对短片段（<500bp）效果有限 | 破坏核酸结构 |
| 质控设置 | 每次实验设阴性对照（无模板）、阳性质控（低拷贝） | 监测试剂与操作污染 |
| 技术优化 | 使用含dUTP和UNG酶的试剂体系；推荐荧光定量PCR而非普通PCR | 可消除扩增产物残留污染 |
注意：若已发生污染，应立即暂停实验，全面清洁（更换试剂、消毒设备），严重时可采用“通风静置”法让污染物自然沉降稀释。移液器内部污染较难清除，建议专用或定期更换
建议
首选预防：通过合理分区、单向流程和人员培训从源头降低风险。
日常维护：定期使用安全高效的核酸去除剂（如非致癌性的LabClean）进行环境清洁。
技术升级：采用封闭检测的荧光定量PCR和UNG防污染系统，显著提升结果可靠性。
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