文章来源公众号：胞内传递            作者：飞师兄

做in vivo CAR-T除了关注递送载体，或许我们还应该调研一下用户需求——T细胞如何摄取这些载体？膜融合还是内吞？

首先，内吞对于维持T细胞生理功能具有重要作用

内吞作用是 T 细胞通过细胞膜内陷形成囊泡，实现胞外物质内化或膜成分调控的关键机制，主要分为网格蛋白介导的内吞（CME） 和非网格蛋白介导的内吞（CIE） 两大类，二者协同调控 T 细胞受体信号、抗原识别、细胞互作及代谢生长等核心功能。

简单来说，CME 负责精准、持续的膜成分调控（如静息 TCR 回收、CTLA-4 降解），CIE 负责快速、大量的响应（如抗原刺激后 TCR 内化、巨胞饮代谢供应），二者互补维持 T 细胞稳态与功能。

T 细胞的内吞作用紧密结合其免疫功能，核心围绕 TCR 信号调控、细胞互作、抗原处理及代谢生长展开。 

举两个例子：

TCR 相关的内吞过程 —— 信号调控的核心

静息状态：未结合抗原的 TCR 通过 CME constitutively 内吞，随后回收至细胞膜，维持膜上 TCR 稳态。

抗原刺激后：
结合抗原的 TCR（ engaged TCR）同时通过 CME 和 CIE 内化：可溶性抗原刺激倾向 CME，膜结合抗原刺激倾向 CIE（依赖 TC21、RhoG 等 GTP 酶）。

巨胞饮与代谢支持
静息 T 细胞中巨胞饮为组成性活动，激活后显著增强，通过非特异性内化胞外氨基酸，转运至溶酶体激活 mTORC1 通路，满足 T 细胞克隆扩增的代谢需求。

T 细胞通过巨胞饮作用将细胞外氨基酸（亮氨酸、谷氨酰胺、精氨酸、丝氨酸，即 LQRS）转运至溶酶体，而这种转运对于雷帕霉素机制性靶蛋白复合物 1（mTORC1）的激活至关重要，mTORC1 的激活则会驱动 T 细胞生长。

以上看出，从生理性角度，T 细胞主要通过内吞作用摄取外来物质，膜融合并非其生理性摄取外来物质的常规方式。

那现在的载体如何进入T细胞？
慢病毒载体 —— 膜融合为主，内吞为辅：
慢病毒表面糖蛋白（如 VSV-G）先与 T 细胞膜上受体结合，多数情况下直接触发病毒包膜与细胞膜的融合，使病毒核心（含 CAR 基因）进入胞质，此过程不依赖内吞；经特殊改造的慢病毒（如靶向 T 细胞表面 CD3 的慢病毒），会先通过受体介导被 T 细胞以网格蛋白介导的内吞（CME）摄入形成内体，再通过内体膜融合释放。

LNP 载体 —— 依赖内吞（CIE/CME）：
LNP 通过表面配体（如靶向 T 细胞的抗体或肽段）与 T 细胞膜结合后，主要被 T 细胞以非网格蛋白介导的内吞（CIE，如巨胞饮）或 CME 摄入，形成内体；后续需通过 “内体逃逸” 机制突破内体膜进入胞质，释放包裹的 CAR mRNA。当然，现在也有着力于开发膜融合的LNP，借助于脂质构成的改变。

这么看病毒和LNP分别是膜融合和内吞的代表，那么哪个方案更好？

内吞内吞齐（七）步走：启动-组装-招募-弯曲-断裂-塑形-释放：更适配 T 细胞生理机制，技术成熟、安全性高，适合需规模化，但是内涵体逃逸需要优化。

膜融合膜融合的机制（二）病毒与细胞的膜融合：理论递送效率更高（绕开内体降解），但非 T 细胞生理方式，如果用病毒存在安全风险，免疫原性等。

从理论上看，结合 T 细胞生理性内吞的靶向性与膜融合的高效逃逸能力的复合方案，是兼顾安全、精准与效率的最优选择。病毒或者LNP可能并不是选择题in vivo CAR-T：慢病毒还是tLNP？，而是综合题，或者还有其他更适合的载体，是多选题。

拭目以待吧，这才几年。