小鼠ELISA试剂盒预实验的实验流程与操作规范
2025-12-30 来源:本站 点击次数:39
小鼠ELISA试剂盒的预实验步骤需重点关注样本处理、标准品稀释及条件优化，以下是关键操作流程：
标准品稀释
将标准品原液加入稀释液，静置10分钟后混匀，按说明书梯度稀释（如160→0 IU/mL）。
建议预实验验证稀释比例，确保样本浓度在检测范围内。
样本准备
血清/血浆：室温凝固10-20分钟后离心（2000-3000转/分，20分钟），收集上清并避免沉淀。
细胞上清：离心后取上清，检测细胞内成分需反复冻融裂解细胞。
组织样本：匀浆后离心，上清分装保存。
孵育与洗涤
首次孵育（37℃ 60-120分钟）后，洗板3-5次，每次浸泡1-2分钟。
酶标抗体孵育（37℃ 30-60分钟）后重复洗涤。
试剂平衡与加样
试剂盒及样本需室温平衡60分钟，避免温度影响反应。
加样时避免气泡，标准品孔与样本孔分别加入15-100μL，空白孔加稀释液。
显色与终止
加入TMB底物避光反应10-15分钟，终止液（50μL/孔）终止后15分钟内测OD值。
注意事项
预实验建议：高浓度样本需稀释验证，避免超出标曲范围。
重复性：至少设置复孔，确保结果可靠性。
通过这些预实验步骤，你可以验证试剂盒的性能，确定最佳的操作条件，以及你的样本是否适合直接进行正式实验。预实验虽然花费时间和试剂，但能大大提高正式实验的成功率和结果的可靠性。
标准品稀释
将标准品原液加入稀释液，静置10分钟后混匀，按说明书梯度稀释（如160→0 IU/mL）。
建议预实验验证稀释比例，确保样本浓度在检测范围内。
样本准备
血清/血浆：室温凝固10-20分钟后离心（2000-3000转/分，20分钟），收集上清并避免沉淀。
细胞上清：离心后取上清，检测细胞内成分需反复冻融裂解细胞。
组织样本：匀浆后离心，上清分装保存。
孵育与洗涤
首次孵育（37℃ 60-120分钟）后，洗板3-5次，每次浸泡1-2分钟。
酶标抗体孵育（37℃ 30-60分钟）后重复洗涤。
试剂平衡与加样
试剂盒及样本需室温平衡60分钟，避免温度影响反应。
加样时避免气泡，标准品孔与样本孔分别加入15-100μL，空白孔加稀释液。
显色与终止
加入TMB底物避光反应10-15分钟，终止液（50μL/孔）终止后15分钟内测OD值。
注意事项
预实验建议：高浓度样本需稀释验证，避免超出标曲范围。
重复性：至少设置复孔，确保结果可靠性。
通过这些预实验步骤，你可以验证试剂盒的性能，确定最佳的操作条件，以及你的样本是否适合直接进行正式实验。预实验虽然花费时间和试剂，但能大大提高正式实验的成功率和结果的可靠性。
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