1. 法规核心：EP11.8新增通则，以MAT法取代RPT法，成为热原检测的首选，要求企业优先采用。
2. 监管协同：全球多国药典认可MAT，中国药典2025版进一步完善相关要求。
3. 方法要点：MAT法在细胞系、NEP对照、结果解读等方面的更新细节。
4. 企业行动：需完成方法转型、文件更新及合规申报。

《欧洲药典》（EP）11.8新增“5.1.13 热原性（Pyrogenicity）”通则，正式取代原有家兔热原检测（RPT），明确单核细胞活化反应测定法（MAT）为热原检测首选方法，并要求企业在产品放行检测中优先采用。这一革命性的修订标志着EP彻底完成了热原检测从动物试验向体外试验的转型，与全球动物福利（3R原则）趋势完全契合。

热原检测由RPT转为MAT，也是契合了现在形势下药物开发新方法体系（New Approach Methodolodgy，NAM）的发展潮流。

一、全球监管协同：MAT从“鼓励”到“必须”之路
2005年 ECVAM
International validation of novel pyrogen tests based on human monocytoid cells.
2006年 ISO 10993-1
gives preference to in vitro models when they yield equally relevant information.
2008年 ICCVAM
Validation Status of Five In vitro Test Methods Proposed for Assessing Poteintial Pyrogenicity of Pharmaceuticals and other Products.
2010年 EP<2.6.30>
The monocyte activation test (MAT) is primarily intended to be used as a replacement for the rabbit pyrogen test.
2012年 FDA
MAT Test is mentioned as an alternative to the rabbit test but should be validated according to USP <1225>.
2014年 USP<151>
A validated, equivalent in vitro pyrogen or bacterial endotoxin test may be used in place of the in vivo rabbit pyrogen test, where appropriate.
2016年 JP<17>
the validation of alternative methods is possible only if the alternative method gives better accuracy & precision.
2017年 EP<2.6.30>
This chapter has been revised in 2017 to include the need to use Non-Endotoxin Pyrogens (NEPs) as positive control.
2018年 IP 8th
Include a new chapter on Monocyte Activation test.
2020年 中国药典 9301通则
单核细胞活化反应测定法（MAT）可作为热原检查。
2025年 EP<2.6.30>
删除RPT法后强化MAT作为RPT的法定替代地位。
2025年 中国药典 9301通则
单核细胞活化反应测定法（MAT）可作为热原检查方法之一。

MAT在2010年被纳入《欧洲药典》作为替代检测手段（EP2.6.30章节），现已成为评估全谱系热原的唯一方法。自2012年美国食品药品监督管理局（FDA）发布行业指南后，MAT即成为替代性热原检测方法。《美国药典》（USP）认可MAT为替代方法。MAT在俄罗斯和欧亚药典中被认可为药典方法，在印度、中国和巴西药典中作为替代方法，在日本则作为补充方法。

此次法规变更促使欧盟上市或销售的注射用药品、生物制品及医疗器械的企业需要考虑：
1、方法转型：需要尽快建立和验证MAT检测能力，或寻找具备资质的研究机构。
2、文件更新：注册档案中的质量控制方法及相关标准操作程序需相应修订。
3、长远视角：此次变革是欧洲药品监管全面减少动物试验的一部分，标志着以体外检测为基础的新一代检测方法将成为未来趋势。

二、欧洲药典中关于MAT法更新核心要点
EP11.8作为EP11.0的重要补编，围绕MAT的标准化、质量控制和检测结果可接受标准进行了精细化修订。《中国药典》从2020版将MAT列为补充方法，到2025版进一步完善相关要求，成为备选方法之一，也实现了与国际法规的部分协同。
1、明确单核细胞系优势
作为可大规模生产及长期稳定供应具有相同特性的细胞来源，其标准化特性是传统全血或外周血单个核细胞无法企及的。EP11.8明确规定经鉴定的细胞系对内毒素和非内毒素热原（NEP）均能检测。
2、非内毒素热原对照要求细化
增加特殊反应情况下NEP多种结果解读的可能性。
3、检测结果解读改变
EP11.8对MAT结果判断更加谨慎，例如3个连续稀释梯度无法同时满足要求的情况。
4、标准曲线
对标曲的类型可以多样化，可接受标准要求更加明确。

表 《欧洲药典》与《中国药典》关于MAT法的要点对比

• 内毒素标准曲线合格；
• 测试溶液对IL-6表达无干扰；
• ELISA 对IL-6定量无干扰；
• 对非内毒素热原能检出。

当然，我们所使用的MAT试剂盒需要供应商有按照ICH Q2(R2)指导原则进行全面的性能验证，包括线性、范围、检出限、定量限、中间精密度、重复性、专属性等。

在EP框架下采用MAT，企业可以节省大量前期验证资源，将精力聚焦于与自身产品相关的特异性验证上，这是兼顾科学、合规与效率的重要进步。

四、应对EP法规变化，企业的行动指南
对企业而言，变更检测方法属于强制性要求。如果你的产品上市许可文件中仍包含这些动物试验，则必须主动发起变更申请将其删除，并评估是否需要采用替代方法。同时，删除或替换家兔热原试验需要提交变更申请。

欧洲药品管理局（EMA）在问答中给出了变更申报类型的建议^[1]：  

• 如申报资料中已经包含适当的方法且已得到批准，并且被允许在未进行家兔热原试验的情况下进行适当控制，则应提交IB类变更，以删除家兔热原试验。风险评估应包括在提交的材料中。
• 在提出替代方法的情况下，变更的类型将取决于方法的类型。对于药典细菌内毒素方法（EP2.6.14或2.6.32），应提交IB类变更。对于药典单核细胞活化试验（EP2.6.30 MAT）或非药典体外方法，应提交II类变更。