蛋白标签(protein tag)是指利用DNA体外重组技术,与目的蛋白一起融合表达的一种多肽或者蛋白,以便于目的蛋白的表达、检测、示踪和纯化等。应用场景主要用于蛋白质检测如:WB、ELISA、IP等。
根据不同的“穿搭风格”又分为:亲和标签,表位标签,荧光标签。
亲和标签类
亲和标签指在重组蛋白的N端或C端添加的一段短肽,通常包含几个到几百个氨基酸,主要用于蛋白质的纯化或提高其溶解度,包括:His、GST、MBP、Strep-tag II、SUMO、Halo等。
宝贝名称:His
宝贝详情:0.84kDa(大小);His-His-His-His-His-His(标签序列);尺寸最小,通用性强,对蛋白影响小,能与多种金属离子发生特殊的相互作用(优点);特异性低,纯化纯度低(缺点);蛋白纯化(应用)
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宝贝名称:GST
宝贝详情:26kDa(大小);211种氨基酸(序列);可增强蛋白可溶性,减少蛋白降解,促进表达(优点);蛋白较大可能影响目标蛋白功能(缺点);蛋白融合表达和纯化,pull-down检测(应用)
宝贝名称:MBP
宝贝详情:40kDa(大小);大肠杆菌K12的malE基因编码,包含369个氨基酸(序列);增加目标蛋白的溶解度和表达水平(优点);标签非常大对目标蛋白干扰较强,功能研究需通过酶切去除(缺点);表达易形成包涵体的蛋白(应用)
宝贝名称:Strep-tag II
宝贝详情:1.06kDa(大小);WSHPQFEK(序列);特异性强、洗脱条件温和、蛋白活性保持良好,适合对蛋白结构和功能有高要求的实验(优点);成本高(缺点);纯化目标蛋白表达量低或背景复杂的体系(应用)
宝贝名称:SUMO
宝贝详情:11.2kDa(大小);97个氨基酸(序列);显著提高融合蛋白的可溶性和稳定性增强表达(优点);亲和纯化时要与其它标签联用(缺点);亲和层析纯化,提高蛋白产量(应用)
宝贝名称:Halo
宝贝详情:33kDa;395个氨基酸(序列);可以与多种荧光配基或生物素快速形成稳定的共价结合,荧光强度强,特异性高(优点);标签较大(缺点);检测和亲和结合或固相化固定目的蛋白(应用)
表位标签类
表位标签往往是短肽序列,可以通过特定的抗体与表位结合,实现对目标蛋白质的精准定位和检测。它们在免疫沉淀、WB、免疫荧光和染色质免疫沉淀等应用中发挥着重要作用。最常用的表位标签有Flag、HA、Myc、V5等。
宝贝名称:Flag
宝贝详情:1.01kDa(大小);DYKDDDDK(序列);具有很强的亲和力和特异性,可用于快速、高效地检测和纯化目标蛋白(优点);需要高成本的抗Flag亲和柱(缺点);高纯度纯化和免疫沉淀(应用)
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宝贝名称:HA
宝贝详情:1.1kDa(大小);YPYDVPDYA(序列);对外源靶蛋白的空间结构影响小,抗体普及特异性高(优点);纯化应用较少(缺点);Western blot、免疫沉淀、免疫荧光和细胞内蛋白表达检测(应用)
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宝贝名称:c-Myc
宝贝详情:1.2kDa(大小);EQKLISEEDL(序列);高特异性的抗Myc单克隆抗体,分子量小(优点);需低pH洗脱,影响蛋白活性(缺点);Western blot、免疫沉淀、免疫荧光和细胞内蛋白表达检测(应用)
宝贝名称:V5
宝贝详情:1kDa(大小);GKPIPNPLLGLDST (序列);抗体特异性好,分子量小(优点);应用范围小于HA和myc(缺点);Western blot、免疫沉淀、免疫荧光(应用)
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荧光标签类
荧光标签可用于活细胞和死细胞检测,最常用的荧光蛋白包括绿色荧光蛋白、橙色荧光蛋白、红色荧光蛋白和黄色荧光蛋白。它们被广泛用于影像学研究,如细胞定位和共表达实验。
参考往期推文链接:
一文揭秘!绿色荧光蛋白的前世今生
超详细!荧光蛋白大盘点
基因组标签计划
中国科学院分子细胞科学卓越创新中心基因组标签计划(GTP)研发中心通过单倍体干细胞介导的半克隆技术获得了数百种标签小鼠模型。通过为所感兴趣的蛋白赋予标签进而通过识别标签研究蛋白质的行为,研究者们可以高效便捷的确定蛋白质的表达位置和功能互作,追踪和分析蛋白质在小鼠机体内的动态行为。
GTP标签小鼠模型可在蛋白质互作,定位等基因功能研究和生物医药研发中发挥重要作用。标签小鼠品系为中国科学院分子细胞科学卓越创新中心所有,南模生物代为分发。
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文末温馨小提示:任何一个融合标签都不是万能的,没有哪一个标签适合所有蛋白的表达,选择标签必须考虑蛋白的性质和实验需求。了解融合标签的特性,选择合适的标签,才能让重组蛋白表达事半功倍。
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