研究团队以 “NSCLC 化疗后免疫治疗失效” 为核心问题，采用 “临床现象→动物模型→细胞机制→药物验证” 的经典科研逻辑，逐步揭开交叉耐药的面纱：

1. 第一步：发现耐药模型的免疫微环境异常 ——TAMs 异常堆积，T 细胞 “消失”
研究首先构建了紫杉醇耐药的 NSCLC 小鼠模型（LLC1 细胞）和人肺癌细胞模型（A549R）。通过免疫荧光、流式细胞术等实验发现：

• 耐药肿瘤中，M2 型 TAMs（CD206⁺）数量显著增加，而效应 T 细胞（CD8⁺）数量大幅减少；
• 临床样本验证：接受过化疗（紫杉醇、顺铂等）的 NSCLC 患者肿瘤中，CD206⁺ TAMs 数量也显著高于未化疗患者。这提示：TAMs 可能是介导交叉耐药的关键免疫细胞。

• 耐药肿瘤的 TIFs/TSNs 能更高效地诱导巨噬细胞向 TAMs 转化；
• 排除蛋白质、脂质等大分子后，发现小分子物质（<3 kDa）是关键，而腺苷（Ado）作为 TME 中经典的免疫抑制小分子，在耐药模型中浓度显著升高；
• 用腺苷脱氨酶（ADA）清除腺苷后，TAMs 转化被显著抑制；添加腺苷类似物 NECA 则可剂量依赖性诱导 TAMs。这一步锁定：腺苷是驱动 TAMs 活化的核心小分子。

• 耐药肿瘤细胞中，CD39 和 CD73 的 mRNA 及蛋白水平显著上调；
• 过表达 CD39/CD73 可增加腺苷分泌并促进 TAMs 转化，敲降则相反；
• 腺苷通过 A₂AR 受体（而非 A₁R、A₂BR、A₃R）激活信号：用 A₂AR 拮抗剂（AZD4635）可完全阻断腺苷诱导的 TAMs 转化。

图：腺苷-A₂AR 信号诱导 TAMs 高表达 IDO1 及色氨酸耗竭检测结果

• 腺苷通过 A₂AR 激活 PKA/mTORC 通路，诱导 TAMs 高表达 IDO1（色氨酸代谢的关键酶）；
• IDO1 会催化色氨酸分解，导致 TME 中色氨酸浓度降低，而色氨酸是 T 细胞活化的必需氨基酸 —— 这正是 T 细胞功能抑制的核心机制；
• 此时，Absin 色氨酸检测试剂盒（abs580221）成为关键工具：通过检测培养基中色氨酸浓度，直接证实：
  • IDO1 过表达的 TAMs 会显著消耗色氨酸，敲降 IDO1 则色氨酸浓度回升；
  • A₂AR 拮抗剂（AZD4635）可逆转腺苷诱导的色氨酸耗竭。这一步直接量化了 “色氨酸耗竭” 这一关键事件，为机制验证提供了确凿证据。

图：化疗耐药肿瘤对 PD-L1 抗体的交叉耐药及 TAMs 清除后的逆转效果

• 清除 TAMs（氯膦酸脂质体）后，抗 PD-L1 抗体可重新抑制耐药肿瘤生长；
• A₂AR 拮抗剂可恢复 T 细胞的细胞毒性和细胞因子分泌（IL-2、IFN-γ、TNF-α），增强 T 细胞对肿瘤的杀伤能力。

图：A₂AR 拮抗剂（AZD4635）恢复 CD8⁺T 细胞杀伤能力及细胞因子分泌

• DL082 单药可抑制耐药肿瘤生长（TGI=22.8%）；
• DL082 + 抗 PD-L1 联合治疗，肿瘤抑制率提升至 42.5%；
• 若再加用紫杉醇，肿瘤抑制率可达 66.9%，且无明显毒性。

图：DL082 单药及联合治疗对耐药肿瘤的抑制效果

• 直接证实因果关系：通过精准检测色氨酸浓度变化，直接证明 “IDO1 高表达→色氨酸耗竭→T 细胞功能抑制” 这一逻辑链，而非间接推测；
• 支撑药物有效性：为 “A₂AR 拮抗剂可逆转色氨酸耗竭” 提供量化数据，为 DL082 的治疗潜力提供机制层面的佐证；
• 实验可靠性保障：Absin 试剂盒的高灵敏度和特异性，确保了不同处理组（敲降 / 过表达、激动剂 / 拮抗剂）间色氨酸浓度差异的准确检测，为研究结论的可信度奠定基础。