酱油中苯甲酸钠含量的测定
2026-01-21 来源:本站 点击次数:41
引言
酱油作为我国传统发酵调味品，以大豆、小麦等为主要原料，经微生物发酵制成，凭借独特的风味和丰富的营养，成为烹饪中不可或缺的食材。随着食品工业的快速发展，为延长酱油保质期、抑制微生物滋生，防腐剂的添加成为行业常规操作。苯甲酸钠因价格低廉、抑菌效果显著，被广泛应用于酱油生产中，但过量摄入会对人体健康造成潜在危害，如引发胃肠道不适、影响肝肾功能等[1-3]。我国《食品安全国家标准食品添加剂使用标准》（GB2760—2024）明确规定酱油中苯甲酸钠的最大使用量不得超过1.18g·kg-1。
目前，食品中苯甲酸钠的检测方法主要依据《食品安全国家标准食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定》（GB5009.28—2016），包含有气相色谱法、高效液相色谱法等。现有检测技术虽然具有较高的检测准确性，但仪器设备昂贵、操作流程烦琐、周期长、维护费用高，难以很好地适应基层检测的需要[4-7]。紫外可见分光光度法因操作简单、仪器费用低廉、检测速度快、日常维护方便而被广泛用于食物检测。因此，本研究采用紫外可见分光光度法，优化样品前处理工艺和检测条件，建立酱油中苯甲酸钠的快速检测方法，旨在为酱油产品质量控制和食品安全监管提供技术支持。
1 材料与方法
1.1 材料与试剂
选取市售不同品牌、不同规格的酱油样品6份，编号S1～S6，涵盖酿造酱油、鲜味酱油、红烧酱油等主流类型，样品均在保质期内，常温密封保存。
苯甲酸钠（含量大于99.5%），上海阿拉丁生物化学技术股份有限公司；磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、盐酸（36.0%～38.0%）、氢氧化钠、二乙醚（均为分析纯），西陇科学股份有限公司；L-谷氨酸钠（L谷氨酸钠）、L-丙氨酸（L-丙氨酸）、甘氨酸，国药集团化学试剂有限公司；超纯水（电阻率不小于18.2mΩ·cm）。
1.2 仪器与设备
紫外可见分光光度计；电子秤；酸碱仪；恒热水浴。
1.3 实验方法
1.3.1 标准溶液配制
苯甲酸钠标准储备液（1mg·mL-1）：准确称取0.5000g苯甲酸钠基准试剂，用超纯水溶解，转入500mL容量瓶，定容至刻度，在4℃处冷藏，贮存7d。
苯甲酸钠标准工作液：分别移取0.25、0.50、1.00、1.50、2.00、2.50、3.00、3.50mL和4.00mL标准储备液于25mL比色管中，用质量分数5%的磷酸二氢钠溶液定容至刻度，配制成质量浓度为10、20、40、60、80、100、120、140μg·mL-1和160μg·mL-1的标准系列工作液。
氨基酸混合干扰液（1mg· mL-1）：准确称取0.1000gL-谷氨酸钠、0.1000gL-丙氨酸、0.1000g甘氨酸，用超纯水溶解，置于100mL容量瓶，定容至刻度，摇匀，待用。
1.3.2 样品前处理
精密吸取50.00mL的酱油样本于100mL烧杯内，用1mol·L-1的盐酸调整pH值为3.0，将其混合后放置30min。将试样转入125mL分液漏斗中，用2000mL乙醚振荡提取15min，然后进行层析，得到上层醚萃取物。将提取物反复提取2次，将3种提取物混合到另外一个分液漏斗中，再添加25mL的5%磷酸二氢钠进行反向提取，摇匀10min，然后将其分层，将底层的水相收集起来。取水相转移至100mL烧杯中，置于60℃恒温水浴锅中加热30min，去除残留乙醚。冷却后将溶液转移至50mL容量瓶中，用5%磷酸二氢钠溶液定容至刻度，摇匀，过0.45μm滤膜后备用。
1.3.3 仪器检测条件
扫描波长200～300nm，比色皿规格为1cm石英比色皿，参比溶液为5%磷酸氢二钠溶液，扫描速度中速，狭缝宽度2nm。以工作吸光度为纵轴，以质量浓度为横轴绘制相应的标准曲线，由试样吸光度计算苯甲酸钠的含量。
1.3.4 方法学验证
（1）检出限与定量限。以3倍信噪比（S/N=3）计算方法检出限，以10倍信噪比（S/N=10）计算定量限。
（2）精密度实验。选取同一酱油样品（S2），按照1.3.2和1.3.3步骤进行6次平行测量，并计算其相对标准偏差。
（3）加标回收率试验。选取9份酱油（S2），测定其苯甲酸钠含量，分为3组，每组3份，分别加入低、中、高3个水平的苯甲酸钠标准溶液，按样品前处理和检测方法操作，计算加标回收率。
（4）干扰实验。在酱油样品处理液中加入适量氨基酸混合干扰液，使氨基酸含量与酱油中常见含量水平一致，测定其吸光度，考察氨基酸对检测结果的干扰情况。
2 结果与分析
2.1 检测波长的选择
取40μg·mL-1苯甲酸钠标准工作液，在200～300nm波长处进行扫描，得到紫外吸收光谱图（图1）。由图1可知，苯甲酸钠在232nm处出现最大吸收峰，且峰形对称、基线平稳，无明显杂峰干扰，因此确定232nm为最优检测波长。
2.2 线性关系、检出限及定量限分析
在质量浓度为10～160μg·mL-1时，苯甲酸钠标准工作液的吸光度与质量浓度呈现良好的线性关系（图2）。线性回归方程为A=0.00852C+0.0214，相关系数（R2）为0.9996。方法检出限为0.15μg·mL-1，定量限为0.50μg·mL-1，满足酱油中苯甲酸钠痕量检测要求。
2.3 精密度实验结果分析
对同一酱油样品（S2）进行6次平行测定，结果如表1所示。样品中苯甲酸钠平均含量为0.612g·kg-1，相对标准偏差为1.87%，说明本研究的结果具有较好的准确性，检测结果稳定可靠。
2.4 加标回收率实验结果分析
选择酱油样品（S2）进行低、中、高3个质量浓度水平的加标实验，并计算回收率和相对标准偏差，结果见表2。平均回收率在97.32%～102.15%，相对标准偏差在1.23%～2.05%。实验结果满足《合格评定化学分析方法确认和验证指南》（GB/T27417—2017）的规定，测定结果具有较高的准确性。
2.5 干扰实验结果分析
在酱油样品处理液中加入氨基酸混合干扰液后，在200～300nm进行扫描，得到吸收光谱图（图3）。由图3可知，加入氨基酸混合液后，样品的吸收光谱与未加干扰液的光谱基本重合，最大吸收峰位置和吸光度值无显著变化（相对标准偏差为0.89%），表明L-谷氨酸钠、L-丙氨酸、甘氨酸等酱油中常见氨基酸对苯甲酸钠的检测无明显干扰，说明方法选择性良好。
2.6 实际样品检测结果分析
采用建立的方法对6份市售酱油样品进行苯甲酸钠含量测定，结果如表3所示。6份样品中均检测出苯甲酸钠，含量在0.428～0.735g·kg-1，均低于GB2760—2024规定的1.18g·kg-1限量标准，其中样品S6含量最低，样品S4含量最高，整体符合食品安全要求。
3 结论
本研究通过优化样品前处理工艺（pH值为3.0条件下乙醚萃取3次，磷酸氢二钠反萃取）和检测条件（检测波长223nm），建立基于紫外可见分步和发展提供有力的技术支持。
文章来源：[1]许琰.酱油中苯甲酸钠含量的测定研究[J].食品安全导刊,2025,19(33):65-67+73.DOI:10.16043/j.cnki.cfs.2025.33.008.
酱油作为我国传统发酵调味品，以大豆、小麦等为主要原料，经微生物发酵制成，凭借独特的风味和丰富的营养，成为烹饪中不可或缺的食材。随着食品工业的快速发展，为延长酱油保质期、抑制微生物滋生，防腐剂的添加成为行业常规操作。苯甲酸钠因价格低廉、抑菌效果显著，被广泛应用于酱油生产中，但过量摄入会对人体健康造成潜在危害，如引发胃肠道不适、影响肝肾功能等[1-3]。我国《食品安全国家标准食品添加剂使用标准》（GB2760—2024）明确规定酱油中苯甲酸钠的最大使用量不得超过1.18g·kg-1。
目前，食品中苯甲酸钠的检测方法主要依据《食品安全国家标准食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定》（GB5009.28—2016），包含有气相色谱法、高效液相色谱法等。现有检测技术虽然具有较高的检测准确性，但仪器设备昂贵、操作流程烦琐、周期长、维护费用高，难以很好地适应基层检测的需要[4-7]。紫外可见分光光度法因操作简单、仪器费用低廉、检测速度快、日常维护方便而被广泛用于食物检测。因此，本研究采用紫外可见分光光度法，优化样品前处理工艺和检测条件，建立酱油中苯甲酸钠的快速检测方法，旨在为酱油产品质量控制和食品安全监管提供技术支持。
1 材料与方法
1.1 材料与试剂
选取市售不同品牌、不同规格的酱油样品6份，编号S1～S6，涵盖酿造酱油、鲜味酱油、红烧酱油等主流类型，样品均在保质期内，常温密封保存。
苯甲酸钠（含量大于99.5%），上海阿拉丁生物化学技术股份有限公司；磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、盐酸（36.0%～38.0%）、氢氧化钠、二乙醚（均为分析纯），西陇科学股份有限公司；L-谷氨酸钠（L谷氨酸钠）、L-丙氨酸（L-丙氨酸）、甘氨酸，国药集团化学试剂有限公司；超纯水（电阻率不小于18.2mΩ·cm）。
1.2 仪器与设备
紫外可见分光光度计；电子秤；酸碱仪；恒热水浴。
1.3 实验方法
1.3.1 标准溶液配制
苯甲酸钠标准储备液（1mg·mL-1）：准确称取0.5000g苯甲酸钠基准试剂，用超纯水溶解，转入500mL容量瓶，定容至刻度，在4℃处冷藏，贮存7d。
苯甲酸钠标准工作液：分别移取0.25、0.50、1.00、1.50、2.00、2.50、3.00、3.50mL和4.00mL标准储备液于25mL比色管中，用质量分数5%的磷酸二氢钠溶液定容至刻度，配制成质量浓度为10、20、40、60、80、100、120、140μg·mL-1和160μg·mL-1的标准系列工作液。
氨基酸混合干扰液（1mg· mL-1）：准确称取0.1000gL-谷氨酸钠、0.1000gL-丙氨酸、0.1000g甘氨酸，用超纯水溶解，置于100mL容量瓶，定容至刻度，摇匀，待用。
1.3.2 样品前处理
精密吸取50.00mL的酱油样本于100mL烧杯内，用1mol·L-1的盐酸调整pH值为3.0，将其混合后放置30min。将试样转入125mL分液漏斗中，用2000mL乙醚振荡提取15min，然后进行层析，得到上层醚萃取物。将提取物反复提取2次，将3种提取物混合到另外一个分液漏斗中，再添加25mL的5%磷酸二氢钠进行反向提取，摇匀10min，然后将其分层，将底层的水相收集起来。取水相转移至100mL烧杯中，置于60℃恒温水浴锅中加热30min，去除残留乙醚。冷却后将溶液转移至50mL容量瓶中，用5%磷酸二氢钠溶液定容至刻度，摇匀，过0.45μm滤膜后备用。
1.3.3 仪器检测条件
扫描波长200～300nm，比色皿规格为1cm石英比色皿，参比溶液为5%磷酸氢二钠溶液，扫描速度中速，狭缝宽度2nm。以工作吸光度为纵轴，以质量浓度为横轴绘制相应的标准曲线，由试样吸光度计算苯甲酸钠的含量。
1.3.4 方法学验证
（1）检出限与定量限。以3倍信噪比（S/N=3）计算方法检出限，以10倍信噪比（S/N=10）计算定量限。
（2）精密度实验。选取同一酱油样品（S2），按照1.3.2和1.3.3步骤进行6次平行测量，并计算其相对标准偏差。
（3）加标回收率试验。选取9份酱油（S2），测定其苯甲酸钠含量，分为3组，每组3份，分别加入低、中、高3个水平的苯甲酸钠标准溶液，按样品前处理和检测方法操作，计算加标回收率。
（4）干扰实验。在酱油样品处理液中加入适量氨基酸混合干扰液，使氨基酸含量与酱油中常见含量水平一致，测定其吸光度，考察氨基酸对检测结果的干扰情况。
2 结果与分析
2.1 检测波长的选择
取40μg·mL-1苯甲酸钠标准工作液，在200～300nm波长处进行扫描，得到紫外吸收光谱图（图1）。由图1可知，苯甲酸钠在232nm处出现最大吸收峰，且峰形对称、基线平稳，无明显杂峰干扰，因此确定232nm为最优检测波长。
2.2 线性关系、检出限及定量限分析
在质量浓度为10～160μg·mL-1时，苯甲酸钠标准工作液的吸光度与质量浓度呈现良好的线性关系（图2）。线性回归方程为A=0.00852C+0.0214，相关系数（R2）为0.9996。方法检出限为0.15μg·mL-1，定量限为0.50μg·mL-1，满足酱油中苯甲酸钠痕量检测要求。
2.3 精密度实验结果分析
对同一酱油样品（S2）进行6次平行测定，结果如表1所示。样品中苯甲酸钠平均含量为0.612g·kg-1，相对标准偏差为1.87%，说明本研究的结果具有较好的准确性，检测结果稳定可靠。
2.4 加标回收率实验结果分析
选择酱油样品（S2）进行低、中、高3个质量浓度水平的加标实验，并计算回收率和相对标准偏差，结果见表2。平均回收率在97.32%～102.15%，相对标准偏差在1.23%～2.05%。实验结果满足《合格评定化学分析方法确认和验证指南》（GB/T27417—2017）的规定，测定结果具有较高的准确性。
2.5 干扰实验结果分析
在酱油样品处理液中加入氨基酸混合干扰液后，在200～300nm进行扫描，得到吸收光谱图（图3）。由图3可知，加入氨基酸混合液后，样品的吸收光谱与未加干扰液的光谱基本重合，最大吸收峰位置和吸光度值无显著变化（相对标准偏差为0.89%），表明L-谷氨酸钠、L-丙氨酸、甘氨酸等酱油中常见氨基酸对苯甲酸钠的检测无明显干扰，说明方法选择性良好。
2.6 实际样品检测结果分析
采用建立的方法对6份市售酱油样品进行苯甲酸钠含量测定，结果如表3所示。6份样品中均检测出苯甲酸钠，含量在0.428～0.735g·kg-1，均低于GB2760—2024规定的1.18g·kg-1限量标准，其中样品S6含量最低，样品S4含量最高，整体符合食品安全要求。
3 结论
本研究通过优化样品前处理工艺（pH值为3.0条件下乙醚萃取3次，磷酸氢二钠反萃取）和检测条件（检测波长223nm），建立基于紫外可见分步和发展提供有力的技术支持。
文章来源：[1]许琰.酱油中苯甲酸钠含量的测定研究[J].食品安全导刊,2025,19(33):65-67+73.DOI:10.16043/j.cnki.cfs.2025.33.008.
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