选择适合的一步式探针法qRT-PCR试剂盒方法
2026-02-27 来源:本站 点击次数:20
一、明确实验需求：从应用场景切入
高灵敏度检测优先
若检测低丰度RNA或病毒（如SARS-CoV-2、HCV），应选择宣称可检测个位数拷贝或0.1 pg总RNA的产品。例如，HiScript II One Step qRT-PCR Probe Kit在多重和单重体系中均表现出高扩增效率，线性范围达7个数量级。
多重检测需求
需同时扩增多个靶标时（如禽流感F与M基因），选择支持多荧光通道且扩增均衡性好的试剂盒。HiScript II U+ Kit已验证可在双重PCR中保持与单重体系相当的灵敏度。
防污染要求严格场景
在高通量或临床检测中，推荐使用含dUTP/UDG系统的试剂盒。HiScript II U+ Kit采用热不稳定UDG，在室温降解含U污染物，50–55℃迅速失活，避免影响cDNA合成，显著降低假阳性风险。
二、关注酶系统与缓冲体系优化
逆转录酶性能：SuperScript III RT可在较高温度（50–55℃）下工作，有效解开RNA二级结构，提升cDNA合成效率。
热启动Taq酶：Platinum Taq或UNICON® HotStart Taq可抑制非特异性扩增，提高反应特异性。
缓冲体系：专有缓冲液能增强酶活性并减少引物二聚体形成，如Hifair® III Kit中的优化因子可提升扩增效率。
高灵敏度检测优先
若检测低丰度RNA或病毒（如SARS-CoV-2、HCV），应选择宣称可检测个位数拷贝或0.1 pg总RNA的产品。例如，HiScript II One Step qRT-PCR Probe Kit在多重和单重体系中均表现出高扩增效率，线性范围达7个数量级。
多重检测需求
需同时扩增多个靶标时（如禽流感F与M基因），选择支持多荧光通道且扩增均衡性好的试剂盒。HiScript II U+ Kit已验证可在双重PCR中保持与单重体系相当的灵敏度。
防污染要求严格场景
在高通量或临床检测中，推荐使用含dUTP/UDG系统的试剂盒。HiScript II U+ Kit采用热不稳定UDG，在室温降解含U污染物，50–55℃迅速失活，避免影响cDNA合成，显著降低假阳性风险。
二、关注酶系统与缓冲体系优化
逆转录酶性能：SuperScript III RT可在较高温度（50–55℃）下工作，有效解开RNA二级结构，提升cDNA合成效率。
热启动Taq酶：Platinum Taq或UNICON® HotStart Taq可抑制非特异性扩增，提高反应特异性。
缓冲体系：专有缓冲液能增强酶活性并减少引物二聚体形成，如Hifair® III Kit中的优化因子可提升扩增效率。
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