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柱后碘衍生法用于黄曲霉毒素测定

2026-03-06     来源:本站     点击次数:44

01方案背景
黄曲霉毒素是一种具有强致癌性的真菌毒素,广泛存在于粮食、油料、中药材等产品,对食品安全和消费者健康构成潜在风险。我国已明确其限量要求并制定了相应的检测标准。然而,常规的荧光检测方法易受基质干扰和荧光猝灭效应的影响,难以实现对低含量样品的准确定量。

Pribolab MDS 3000S 柱后衍生系统与高效液相色谱联用,可在线实现碘衍生,提高黄曲霉毒素B₁、G₁的荧光强度,提升检测灵敏度与结果稳定性,符合GB 5009.240国家标准检测要求。本方案基于该系统建立稳定可靠的检测方法,为原料验收、过程控制及成品放行提供技术支持。

02高效液相色谱—柱后衍生
1. 检测原理
黄曲霉毒素B₁、G₁自身荧光弱且易猝灭,无法直接实现高灵敏检测。通过Pribolab MDS 3000S 柱后衍生系统,在色谱柱后在线引入碘溶液,与 B₁、G₁分子中的双键发生加成反应,生成荧光强度高、性质稳定的碘代衍生物。该反应在加热条件下效率更高,可显著提升荧光信号,消除基质与流动相的猝灭干扰,最终实现对黄曲霉毒素 B₁、G₁的高灵敏度、高选择性荧光检测。

2. 仪器方法
2.1 液相方法
色谱柱:Pribolab®黄曲霉毒素衍生专用色谱柱(货号:EH04080)
流动相:A 相,水;B相,乙腈-甲醇(50+50)
柱温:40℃
激发波长:360nm 发射波长:440nm
进样量:50μL
流速:1mL/min

2.2 衍生方法
衍生试剂:Pribolab®黄曲霉毒素衍生试剂包(货号:YS-AF-005)
衍生温度:70℃
流    速:0.2mL/min

3. 检测结果
3.1  线性
分别精密吸取以下浓度对照品溶液,注入液相色谱仪:

AFB1:0.5ng/mL、2 ng/mL、5ng/mL、10ng/mL、20ng/mL、40ng/mL

AFB2:0.15ng/mL、0.6 ng/mL、1.5ng/mL、3ng/mL、6ng/mL、12ng/mL

AFG1:0.5ng/mL、2 ng/mL、5ng/mL、10ng/mL、20ng/mL、40ng/mL

AFG2:0.15ng/mL、0.6 ng/mL、1.5ng/mL、3ng/mL、6ng/mL、12ng/mL

以峰面积为纵坐标,浓度为横坐标,绘制标准曲线,结果表明曲线线性关系良好,线性相关系数均大于0.999。

3.2重复性
取浓度为AFB1:AFB2:AFG1:AFG2(5:1.5:5:1.5)ng/mL 的黄曲霉毒素标准品溶液,连续进样 6 针,记录各针峰面积与保留时间。结果显示,6 针检测的峰面积相对标准偏差(RSD):AFB1为3.82%、AFB2为0.92%、AFG1为0.46%、AFG2为1.21%,符合检测方法学要求。

03方案配置

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