做神经分化、微管研究或者狂犬病诊断的同学,Neuro-2a(N2a)是绕不开的一株。它是小鼠脑来源的成神经细胞,最出名的就是能分化成各种神经元样细胞,还能产生大量微管蛋白。
Neuro-2a 是小鼠脑神经瘤细胞,由 Klebe 和 Ruddle 从 A/J 小鼠大脑自生肿瘤建立,具神经元和变形干细胞形态。它大量产生微管蛋白、表达乙酰胆碱酯酶,能分化成多种神经元,可用于 3D 培养、高通量筛选、神经科学和毒理学研究。
细胞背景与来源
来源:小鼠(A/J 品系),大脑自生肿瘤。贴壁生长但松散,呈圆形细胞和带触角多角形细胞的混合形态,培养时存在 30%-50% 的漂浮细胞。经检测鼠痘病毒阴性。
应用场景与研究价值
- 神经分化:经维甲酸、血清饥饿等诱导分化为神经元样细胞,研究神经发育。
- 微管/轴浆运输:研究微管蛋白合成组装、长春碱沉淀微管蛋白机制,是细胞骨架研究的经典模型。
- 诊断与毒理:世界动物卫生组织(OIE)用它做狂犬病常规诊断;也用于神经毒理学和 3D 培养。
培养特性与注意事项
培养基:EMEM(MEM + NEAA)+ 10% FBS + 1% 双抗。环境 37℃、5% CO2、饱和湿度。注意:不建议用高糖 DMEM,否则可能形态改变、长得更慢。
生长较慢,1:2 传代周期约 3-5 天。传代:PBS 润洗后胰酶消化,1000 rpm 离心 3 min;换液和传代时要把漂浮细胞离心收集、和贴壁细胞混在一起继续养,别扔,否则细胞越养越稀。
冻存:92% FBS + 8% DMSO,程序降温盒 -80℃ 过夜转液氮。复苏:37℃ 水浴 2 min 内,150g 离心 2 min。生物安全:BSL-1。
注意:对血清要求高,用验证过效果的血清;触角消化时易断裂成碎片(黑点),不影响生长,PBS 润洗换液即可;刚接种 48 h 内多为圆形未铺展,属正常。
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Neuro-2a 对血清挑、漂浮细胞又容易让人误操作,体系稳定很关键。配套需用专用培养基和血清,细胞 STR 鉴定齐全,技术支持也能帮你判断漂浮细胞该怎么处理。