“又失败了！”实验室里传来一声叹息。
小王看着手中的NGS测序数据，文库构建的浓度明明符合标准，为什么测序结果却总是不理想？同样的样本，同样的流程，问题究竟出在哪里？
导师走过来看了一眼：“你用的什么定量方法？”
“Nanodrop啊，260/280比值很好，浓度也够。”
“问题可能就出在这里，”导师摇摇头，“NGS样本检测，你得用Qubit。”
 

传统方法的“盲区”
在NGS实验全流程中，样本质量检测是决定成败的第一步。许多实验室习惯使用紫外分光光度计（如Nanodrop）进行核酸定量，这种方法快速简便，但有一个致命缺陷：

它无法区分DNA、RNA、核苷酸和杂质！

紫外分光光度计通过检测260nm处的吸光度来推算核酸浓度，但溶液中的游离核苷酸、降解的核酸片段、蛋白质残留等都会吸收260nm的光，导致浓度被高估。这种“虚假繁荣”会让后续的文库构建基于错误的浓度计算，最终导致测序数据质量差、覆盖度不均。

Qubit技术：分子级别的“精准探测”
Qubit荧光定量仪采用完全不同的原理，它就像给每个目标分子贴上了“专属荧光标签”：
1. 特异性荧光染料：
Qubit使用与核酸特异结合的荧光染料，这些染料只有对应结合到双链DNA、单链DNA或RNA的其中一种上时才会发出荧光

2. 绝对定量：
通过已知浓度的标准品建立标准曲线，直接计算样本中的核酸分子数量

3. 超高灵敏度：
可检测低至10pg/μL的微量样本，比传统方法敏感1000倍以上

为什么NGS必须使用Qubit？

1. 微量样本的“守护者”
NGS实验中，尤其是临床样本、单细胞测序等场景，起始材料往往极其有限。Qubit能够准确测量纳升级别的微量样本，确保每一份珍贵样本都被合理利用。

2. 文库定量的“黄金标准”
文库构建后，准确知道有多少接头连接的片段至关重要。Qubit可以特异性检测双链DNA，排除游离引物、接头二聚体的干扰，确保上机测序的浓度真实可靠。

3. 质量控制“第一道防线”
Qubit提供精准DNA浓度检测，异常的测量值往往是样本质量预警信号。

贴心提示：

• 不同核酸类型选择对应试剂盒（dsDNA、RNA、ssDNA等）
• 剧烈震荡可能引起荧光淬灭，轻柔混匀即可
• 注意试剂保存条件，避免反复冻融

超越定量的价值
在现代NGS实验室，Qubit已不仅是定量工具，更是全流程质量控制体系的核心环节。它提供的精准数据支撑着：
1. 样本准入决策：是否继续后续实验
2. 实验条件优化：酶切时间、PCR循环数调整
3. 成本效益平衡：避免过度测序或测序不足
4. 结果可重复性保障：不同批次实验间的标准化

基因组学到转录组学，Qubit以其无可替代的精准性，守护着每一个NGS实验的起点。在追求“精准医学”的今天，我们比任何时候都更需要从源头确保数据的真实可靠。

精准，从来不只是口号。在NGS的世界里，它始于样本进入仪器的第一刻，始于那个小小的Qubit检测管中。

精准检测，从“Q”开始。

麦伯生物自主研发Qubit专用试剂耗材，适配ThermoFisher Qubit 4 荧光仪、Qubit Flex 荧光仪，欢迎咨询联系！