肝脏对全身应用AAV有较高的亲合性，AAV在肝脏中的注射方式分为直接传送和外周传送两种（下表所示），其中尾静脉注射和腹腔注射是目前应用比较广泛的注射方式，操作者也可根据实验目的选择合适的注射方式。

图一：小鼠肝脏中AAV给药途径示意图

（A）小鼠侧视图，显示侧尾静脉或眶静脉窦注射路线；（B）小鼠仰卧位图，显示非手术腹膜内和手术肝内、脾内和门静脉输送路径。

图二：推荐的AAV肝脏注射方式和血清型种间比较

在此，我们介绍一下几种常用的注射方式，肝门静脉注射、肝实质内注射、尾静脉注射以及新生小鼠静脉注射的操作步骤供大家参考。

1. 肝门静脉注射

（1）通过腹腔注射麻醉剂将成年小鼠麻醉，对小鼠腹部局部区域做去毛及消毒处理；

（2）在距剑突软骨下方2-3mm处，做一个2-3cm的中线切口。

（3）暴露门静脉，使用30G针头在1min内均匀缓慢注射0.2 ml病毒悬液。

注：门静脉是一种相对较大的静脉，提起肝前叶一般即可看到门静脉。在手术过程中，用浸泡在生理盐水中的无菌纱布覆盖肠道，保持肠道湿润。

（4）注射后保持针位约10-20秒。取出针后，做好防出血处理；

（5）缝合腹部，将小鼠放置于加热灯下，直至恢复意识。然后将其放回笼子单独饲养，直到伤口完全愈合。

2. 肝内注射

（1）通过腹腔注射麻醉剂将成年小鼠麻醉，对小鼠腹部局部区域做去毛及消毒处理；

（2）在距剑突软骨下方2-3mm，做一个2-3cm的中线切口，以露出肝脏。

（3）用固定在结核菌素注射器上的30G针头将病毒悬液缓慢注入肝实质中。

注:在注射过程中通过手术立体镜监测注射部位，确保无出血或外渗。如果出现上述任何一种情况，需取出针头，轻轻按压止血，然后选择一个新的部位进行注射。

（4）取出针，用无菌纱布轻轻按压止血。

（5）再选择其他部位进行注射。

注：一只成年小鼠一次可选择4 ~ 5个不同的注射位点(40 ~ 50μl/site)，总剂量可达200μl。

（6）缝合腹部，将小鼠放置于加热灯下，直至恢复意识。然后将其放回笼子单独饲养，直到伤口完全愈合。

3. 尾静脉注射

（1）将小鼠放在标准限制器中，使注射器能够完全接触到整个尾巴长度。

（2）将一根30G的针头固定在1cc结核菌素注射器上，尽可能远的插入尾部侧面静脉。选择一个远端部位，如果第一次注射失败，可以选择另一个更近端的注射部位。

注：a：小鼠尾巴上较容易接触到的静脉位于尾巴的侧面，且侧静脉非常浅，无需进针很深；小鼠尾部背面的静脉很难常规注射；尾部腹面的血管是动脉，不可注射。

b：注射前用温水轻轻地加热尾巴，可以使血管得到一定程度的舒张，便于注射。

（3）针头到位后，缓慢注射病毒悬液。

注: 如果注射器由于压力增加而难以压下柱塞，此时很可能针头不在静脉中。在这种情况下，应取下针头并选择一个新的位置重新注射。

（4）注射完成后取下针头，轻轻按压止血，然后立即将小鼠放回笼中。

注：使用此方法注射成年小鼠，病毒用量控制在300 - 400μl较佳。

4. 新生小鼠静脉注射

（1）需两个人配合完成，一人固定，一人注射；

（2）注射前将小鼠置于干毛巾上，减少活动及损伤；

（3）一人轻轻固定小鼠，使侧面朝上，暴露眼睛至颈部的颞浅静脉，置于放大镜下；

（4）另一人沿着自头至颈的方向将30G的注射针头插入静脉旁的皮下，慢慢推进静脉（新生鼠皮肤呈现半透明，较易观察）；

（5）慢慢注射病毒悬液；（如果注射成功，注射部位远端静脉会呈白色，如果未成功，皮下注射10μl即可看到明显的隆起）

（6）注射完成后，取下针头，轻轻按压静脉，通常2-3分钟会停止出血；

（7）将新生鼠在加热灯下照射后，放回母鼠身边；

（8）如果注射不成功，让小鼠恢复5-10分钟，然后在另一侧尝试第二次注射；

注：使用此方法注射新生小鼠，病毒用量控制在100μl以内较佳。