PfAgo核酸内切酶的工作原理、应用及常见问题解答
2026-04-08 来源:本站 点击次数:57
一、PfAgo 核酸内切酶是什么？
PfAgo 全称为Pyrococcus furiosus Argonaute，是来源于激烈火球菌（Pyrococcus furiosus）的热稳定核酸内切酶，属于 Argonaute（Ago）蛋白家族。该酶通过基因工程技术在重组大肠杆菌中表达纯化，是分子生物学研究、核酸检测领域的重要工具酶。
二、PfAgo 核酸内切酶的工作原理
PfAgo 的核心功能依赖引导 DNA（guide DNA）与靶核酸的碱基互补配对：
1，引导 DNA 与靶核酸（以单链 DNA 为主，对单链 RNA 也有一定活性）发生碱基互补配对，形成特异性结合；
2，PfAgo 激活核酸内切酶活性，对靶核酸进行特异性剪切；
3，剪切过程不受靶标序列、剪切位点相邻序列的限制，可灵活设计引导序列。
此外，PfAgo 具有极强的热稳定性，95℃孵育 1 小时后酶活性无损失，适配高温反应体系。同时，PfAgo 剪切靶标核酸产生的产物，可作为新生的次级引导 DNA，为高灵敏度核酸检测技术提供基础。
PfAgo 核酸内切酶体外切割活性验证电泳图
下图为 PfAgo 核酸内切酶的体外切割实验结果，直观验证其剪切活性：
M：核酸 Marker，标注了 16 nt、25 nt、35 nt、50 nt、60 nt 的核酸条带，用于判断核酸片段长度；
Control 组：未添加 PfAgo，仅存在 60 nt 的靶标 DNA（Target）条带，无剪切产物；
PfAgo 组：添加 PfAgo 后，60 nt 靶标 DNA 被有效剪切，产生 35 nt、25 nt 的剪切产物（product），同时保留 16 nt 的引导 DNA（guide），证明 PfAgo 的高效特异性剪切活性。
三、PfAgo 核酸内切酶常见问题解答（FAQ）
Q1：pfAgo 核酸内切酶和 Ago 核酸内切酶（微球）有哪些差别？
A：两者状态不一样、保存条件不一样；检测方法、使用的效果几乎一样。
Q2：pfAgo 核酸内切酶 buffer 是否含有金属离子？
A：Buffer 中不含金属离子，对于扩增反应没有任何影响。一般 PfAgo 酶可以兼容绝大多数 PCR buffer，但普通 Taq 酶不兼容 PfAgo buffer。
Q3：限制性内切酶无法切割 DNA 有哪些原因？
A：
1）内切酶失活：用标准底物检测酶活性；
2）DNA 不纯，含有 SDS、酚、EDTA 等内切酶抑制因子：将 DNA 过柱纯化，乙醇沉淀 DNA；
3）条件不适（试剂、温度）：检查反应系统是否最佳；
4）DNA 不存在该酶识别序列：换用其它的酶切割 DNA 或过量酶消化验证。
PfAgo 全称为Pyrococcus furiosus Argonaute，是来源于激烈火球菌（Pyrococcus furiosus）的热稳定核酸内切酶，属于 Argonaute（Ago）蛋白家族。该酶通过基因工程技术在重组大肠杆菌中表达纯化，是分子生物学研究、核酸检测领域的重要工具酶。
二、PfAgo 核酸内切酶的工作原理
PfAgo 的核心功能依赖引导 DNA（guide DNA）与靶核酸的碱基互补配对：
1，引导 DNA 与靶核酸（以单链 DNA 为主，对单链 RNA 也有一定活性）发生碱基互补配对，形成特异性结合；
2，PfAgo 激活核酸内切酶活性，对靶核酸进行特异性剪切；
3，剪切过程不受靶标序列、剪切位点相邻序列的限制，可灵活设计引导序列。
此外，PfAgo 具有极强的热稳定性，95℃孵育 1 小时后酶活性无损失，适配高温反应体系。同时，PfAgo 剪切靶标核酸产生的产物，可作为新生的次级引导 DNA，为高灵敏度核酸检测技术提供基础。
PfAgo 核酸内切酶体外切割活性验证电泳图
下图为 PfAgo 核酸内切酶的体外切割实验结果，直观验证其剪切活性：
M：核酸 Marker，标注了 16 nt、25 nt、35 nt、50 nt、60 nt 的核酸条带，用于判断核酸片段长度；
Control 组：未添加 PfAgo，仅存在 60 nt 的靶标 DNA（Target）条带，无剪切产物；
PfAgo 组：添加 PfAgo 后，60 nt 靶标 DNA 被有效剪切，产生 35 nt、25 nt 的剪切产物（product），同时保留 16 nt 的引导 DNA（guide），证明 PfAgo 的高效特异性剪切活性。
三、PfAgo 核酸内切酶常见问题解答（FAQ）
Q1：pfAgo 核酸内切酶和 Ago 核酸内切酶（微球）有哪些差别？
A：两者状态不一样、保存条件不一样；检测方法、使用的效果几乎一样。
Q2：pfAgo 核酸内切酶 buffer 是否含有金属离子？
A：Buffer 中不含金属离子，对于扩增反应没有任何影响。一般 PfAgo 酶可以兼容绝大多数 PCR buffer，但普通 Taq 酶不兼容 PfAgo buffer。
Q3：限制性内切酶无法切割 DNA 有哪些原因？
A：
1）内切酶失活：用标准底物检测酶活性；
2）DNA 不纯，含有 SDS、酚、EDTA 等内切酶抑制因子：将 DNA 过柱纯化，乙醇沉淀 DNA；
3）条件不适（试剂、温度）：检查反应系统是否最佳；
4）DNA 不存在该酶识别序列：换用其它的酶切割 DNA 或过量酶消化验证。
| 名称 | 货号 | 规格 |
| PfAgo核酸内切酶（RADAR用微球) | abs60370-50T | 50T |
| PfAgo核酸内切酶 | abs60340-200uL | 200uL |
| PfAgo核酸内切酶 | abs60340-200uL | 200uL |
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