荧光染色技术,广泛用于样本中待测标志物的含量分析、待测标志物在细胞内或细胞外的分布以及不同标志物之间的相互作用,在细胞水平和组织水平进行实验论证。
在切片免疫荧光染色实验中,高清的图像更利于后续的空间结构分析和精准的定量分析。因此,选择合适的切片扫描设备尤为重要。现有主要两大类,一类是以共聚焦显微镜为代表的设备,其成像效果佳,可有效去除背景荧光,但是操作复杂,使用门槛高,没有足够的经验很难拍出高质量的图片。另一类设备是玻片扫描仪,相对于共聚焦显微镜,操作简单易上手,然而主流的荧光切片扫描仪多是宽场成像(非共聚焦成像),图片的背景荧光强、图片质量差,无法精准定位和定量。
然而,这两类设备存在一些共性问题。比如易脱焦,不能判断最佳聚焦位置,尤其对平整度较差的样本(图1)。扫描后需要后期拼接——受限于成像视野和原理,需要将整个样本分割成小块区域,逐个扫描后再拼接完成,一定程度上导致图像在接缝处失真。另外,CCD面成像会导致成像区域的中央和四周光强不一致,反映在图像上为中央明亮,周围暗淡,需要进行阴影校正。(图2)

图1 (左)平整度较差的样本,扫描完成的图像四周出现明显脱焦 (右)传统扫描仪扫描后的图片,需要后期拼接和阴影校正,影响图片质量
在此背景下,法国Innopsys公司推出了InnoQuant激光共聚焦荧光定量组织切片&生物芯片扫描仪。这款设备利用激光共聚焦成像,逐点成像、整片一次扫描的技术,给免疫荧光染色技术带来了新的革命。
InnoQuant的优点
01、自动对焦InnoQuant内置三种对焦模式:定焦(Fixed focus)、Autofocus by surface和Autofocus by content。除了定焦模式采用固定不变的焦距之外,另外两种模式可以根据样本的内部结构或者玻片自身的平整度,识别出最佳的聚焦平面,避免脱焦。
02、逐点扫描,无需拼接,无需阴影校正不同于其他设备的多个分割区域扫描再拼接的方法,InnoQuant采用逐点扫描,一次成像的方式,将整个样本最真实地保存下来,无需任何后续拼接和加工。此外,逐点扫描保证采集样本信息时所有的激发光都保持同一水平,不存在因光强不一致导致的结果失真,无需阴影校正,保证后续分析结果准确。(图2)

图2 (A)传统扫片原理(左)与InnoQuant扫片原理(右) (B)百合花切片扫描结果比较:传统扫片装置(左)与InnoQuant扫描结果(右)
03、四色荧光同时扫描InnoQuant内置4组独立激光光源和PMT检测器,每个PMT最多可安装7个滤光片,不但兼容常用荧光染料,还可根据用户需求定制。此外,4个检测通道可同时工作,一张4荧光染料标记的标准玻片(26mm*76mm),在17min内完成扫描,而共聚焦显微镜则需要数个小时,InnoQuant扫描速度更快。
总结作为一款最新推出产品,InnoQuant凭借其独特的工作原理,强有力的硬件配置,已成为满足广大科研工作者免疫荧光染色的强有力的助手。

Innopsys 成立于1999年。总部位于法国,致力于生物医学领域相关仪器和软件的自主研发和生产。
InnoQuant激光共聚焦荧光组织切片&生物芯片扫描仪
• 实时激光共聚焦光路,4套独立的激光光源和PMT检测器,成像质量高;
• 多激光光路同时扫描,扫描速度快;
• 线扫描方式,图片无拼痕、无需阴影矫正,并有效降低荧光的光漂白现象及信号损失,实现精准定量;
• 组织切片的扫描和定量分析,用于神经生物学、肿瘤微环境、单细胞蛋白组学等领域;
• 微阵列芯片(基因/核酸/糖/蛋白/化合物芯片)、 单细胞WB免疫印迹芯片、覆膜芯片、细胞组织芯片及商品化芯片的扫描和分析,用于蛋白互作分析、细胞信号转导通路研究、疾病标志物筛选、化合物药物筛选、多重因子检测,病理组织标志物筛查等研究 。
环亚生物科技(APG BIO)作为法国Innopsys公司中国区代理,为客户提供生物芯片扫描、点样以及高通量筛选的整体解决方案和服务。