NF-H神经丝蛋白HELISA试剂盒使用说明书
2026-05-21 来源:本站 点击次数:59
使用NF-H神经丝蛋白HELISA试剂盒需遵循双抗体夹心法标准流程，核心步骤包括样本处理、标准品稀释、加样孵育、洗涤显色和浓度计算。
一、实验前准备
试剂平衡：将试剂盒所有组分从2–8℃取出，室温（18–25℃）平衡20分钟，避免冷凝水影响反应。
洗涤液配制：按说明书比例稀释浓缩洗涤液（如30倍稀释），即20 mL浓液加580 mL蒸馏水。
标准品复溶与稀释：
取标准品冻干粉，加入1 mL标准品稀释液溶解，得10,000 pg/mL贮液。
倍比稀释为5,000、2,500、1,250、625、312、156、78 pg/mL，最后一孔为空白对照（0 pg/mL）。
二、加样与孵育
设置孔位：在预包被NF-H捕获抗体的微孔板中设置标准品孔、样本孔和空白孔，建议设复孔。
加样：
每孔加50 μL标准品或待测样本（血清、血浆、脑脊液等）。
空白孔加50 μL稀释液。
孵育：37℃温育1–2小时（具体时间依说明书），微孔板需覆盖封板膜防止污染和蒸发。
三、洗涤与检测
洗涤：
手工洗板：吸去孔内液体，每孔加满洗涤液（≥300 μL），静置1分钟，甩干，重复5次，最后在吸水纸上拍干。
自动洗板机：设置350 μL/孔，浸泡1分钟，洗5次。
加检测抗体：每孔加50 μL HRP标记的检测抗体（1:100稀释），37℃孵育1小时。
再次洗涤：同上步骤洗板5次。
显色：
每孔加100 μL TMB底物液，37℃避光显色15–30分钟。
显色后立即每孔加50 μL终止液（如1 M H₂SO₄），终止反应，溶液由蓝变黄。
四、读数与计算
测定OD值：用酶标仪在450 nm波长下读取各孔吸光度（OD值），空白孔调零。
标准曲线拟合：以标准品浓度为横坐标，OD值为纵坐标，绘制标准曲线（通常为S型）。
样本浓度计算：根据样本OD值在曲线上查得对应浓度，若样本稀释过需乘以稀释倍数。
⚠️ 注意事项：
所有操作避免交叉污染，加样器枪头一次性使用。
底物液对光敏感，显色过程需避光进行。
试剂不可混用不同品牌或批次，防止结果偏差。
样本避免反复冻融，溶血或浑浊样本需离心处理。
一、实验前准备
试剂平衡：将试剂盒所有组分从2–8℃取出，室温（18–25℃）平衡20分钟，避免冷凝水影响反应。
洗涤液配制：按说明书比例稀释浓缩洗涤液（如30倍稀释），即20 mL浓液加580 mL蒸馏水。
标准品复溶与稀释：
取标准品冻干粉，加入1 mL标准品稀释液溶解，得10,000 pg/mL贮液。
倍比稀释为5,000、2,500、1,250、625、312、156、78 pg/mL，最后一孔为空白对照（0 pg/mL）。
二、加样与孵育
设置孔位：在预包被NF-H捕获抗体的微孔板中设置标准品孔、样本孔和空白孔，建议设复孔。
加样：
每孔加50 μL标准品或待测样本（血清、血浆、脑脊液等）。
空白孔加50 μL稀释液。
孵育：37℃温育1–2小时（具体时间依说明书），微孔板需覆盖封板膜防止污染和蒸发。
三、洗涤与检测
洗涤：
手工洗板：吸去孔内液体，每孔加满洗涤液（≥300 μL），静置1分钟，甩干，重复5次，最后在吸水纸上拍干。
自动洗板机：设置350 μL/孔，浸泡1分钟，洗5次。
加检测抗体：每孔加50 μL HRP标记的检测抗体（1:100稀释），37℃孵育1小时。
再次洗涤：同上步骤洗板5次。
显色：
每孔加100 μL TMB底物液，37℃避光显色15–30分钟。
显色后立即每孔加50 μL终止液（如1 M H₂SO₄），终止反应，溶液由蓝变黄。
四、读数与计算
测定OD值：用酶标仪在450 nm波长下读取各孔吸光度（OD值），空白孔调零。
标准曲线拟合：以标准品浓度为横坐标，OD值为纵坐标，绘制标准曲线（通常为S型）。
样本浓度计算：根据样本OD值在曲线上查得对应浓度，若样本稀释过需乘以稀释倍数。
⚠️ 注意事项：
所有操作避免交叉污染，加样器枪头一次性使用。
底物液对光敏感，显色过程需避光进行。
试剂不可混用不同品牌或批次，防止结果偏差。
样本避免反复冻融，溶血或浑浊样本需离心处理。
相关文章
更多 >