Section.01 什么是Fc受体?
Fc受体是免疫细胞(巨噬细胞、单核细胞、粒细胞、NK细胞等除T细胞外几乎所有的免疫细胞)表面的一类重要的跨膜受体,它的核心功能是识别和结合抗体的Fc段。
任何抗体(IgG、IgM等)的结构都像是一个"Y"字形:
Fab段 Y字的两个"手臂",负责特异性识别并结合抗原,是抗体特异性的主要功能区域。
Fc段 Y字的"柄",不负责识别抗原,但负责与免疫细胞表面的Fc受体结合或者激活补体。
简单来说,Fc受体可以天然地结合抗体的Fc段,形成的复合物并不是流式抗体中目标抗原-流式抗体的复合物,而是Fc受体-流式抗体的复合物。

Section.02 为什么要封闭Fc受体?
如果在检测表达Fc受体的免疫细胞时,未经封闭,Fc受体会结合流式抗体的Fc段,导致细胞被标记并被检测呈阳性——而这并非目的抗原和流式抗体特异性结合产生的阳性,从而产生大量假阳性,导致检测结果失去参考意义。
因此,在表达Fc受体的免疫细胞流式实验时,需要对其进行Fc受体封闭,使之无法结合流式抗体,从而保证检出的阳性可靠。
封闭过程:加入足够量的无关抗体,先让Fc受体结合这些无关抗体,再加流式抗体后就不会被Fc受体结合,流式抗体只能和目的抗原结合,从而实现检测目的、保证阳性可靠。

Section.03 怎么封闭Fc受体?
目前国内外有多个厂家的Fc封闭产品,例如Fc block™ Reagent、TruStain FcX™ 和 Fc Receptor Binding Inhibitor 等,主要通过特异性结合并阻断CD16(FcγR III)、CD32(FcγR II)和CD64(FcγR I)等受体的表位,防止后续流式抗体的Fc段发生非特异性结合。
尚恩生物也推出了相应的Fc封闭试剂:
SNAB-001 Purified Anti-Mouse CD16/32 Antibody (2.4G2) — 用于小鼠样本的Fc封闭
SNAB-002 Purified Anti-Human CD16 Antibody (3G8) — 用于人样本的Fc封闭

Section.04 封闭注意事项
1. Fc受体封闭应在细胞处理完成后、孵育流式抗体之前进行,以达到最佳封闭效果。
2. 牛血清白蛋白(BSA)或胎牛血清(FBS)不能封闭Fc受体,它们只能封闭非特异性蛋白结合位点(疏水作用),无法阻断抗体Fc段与Fc受体的特异性结合。
3. 同型对照的抗体或同种属的血清虽然理论上能起到封闭Fc受体的作用,但由于特异性不足、样本差异等,其效果远不如采用针对Fc受体的特异性抗体。
4. 实际实验中建议设置"无封闭对照"(No Fc block)和"有封闭对照",比较两者的荧光强度差异,以确定封闭的必要性和效果。
5. Fc封闭不能代替同型对照实验,同型对照组也是需要正常进行的。
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