超滤浓缩管是实验室常用的耗材,通常用于样品的浓缩和缓冲液置换。掌握以下这些小技巧,发挥超滤管最大效力。

1、一次讲清超滤管的截留分子量(MWCO)
很多小伙伴纠结超滤管的截留分子量MWCO怎么选。实际上,截留分子量(MWCO)是用于衡量超滤管截留性能的关键指标,标称MWCO能截留90%的该尺寸的标准球形蛋白。

但是我们平常用到的样品和蛋白,在结构,构象和空间形态上均存在差异,很难与标准测试蛋白完全一致。所以对于蛋白样品的截留浓缩,通常建议超滤管的截留分子量为蛋白分子量的1/3-1/6。如果是病毒或者核酸样品,可以参考下面的表格。

非蛋白类的常见样品MWCO建议:
浓缩外泌体:推荐使用100KD超滤管;
浓缩抗体:推荐使用30KD超滤管;
浓缩慢病毒:推荐使用100KD超滤管;
腺病毒:推荐使用50KD超滤管;
如果不知道分子量,可以参考超滤管的膜标称孔径

2、优化摆放位置增加浓缩效率
如果大家仔细观察,会发现Cytiva的超滤浓缩管的滤膜为直立结构,因此建议离心时,滤膜的摆放方向需要朝向离心机的轴心,这样可以最大利用膜面积,如下图所示:

小提示:如果是多个样品间的平行实验,要特别注意放置方向一致以保证相同的浓缩效率。
3、拿到新的超滤管可以直接用嘛?
为保证超滤膜的稳定,滤膜出厂时添加了微量的甘油和叠氮化钠,如果对实验有影响,可加入一定量的水或者缓冲液进行两次离心。
这也是超滤管看起来是干的,实际上并不影响使用的原因。如果超滤管使用进行保存,可用20%乙醇或0.1 M NaOH浸泡,4 ℃保存,务必保持滤膜润湿,滤膜干燥可能破裂。
4、超滤管可以重复使用嘛?
超滤管通常不建议重复使用,若重复使用,可使用0.1 M-0.5M NaOH(浸泡0.5-1 h后)进行清洁,(最高可使用1M NaOH清洗),然后使用超纯水再次清洗。(注意有些品牌的超滤管不能使用NaOH清洗,Cytiva超滤管可以使用NaOH清洗)
5、样品很珍贵,如果提高样品回收率?
选择MWCO更小的超滤管:例如选择MWCO为蛋白分子量的1/6的超滤管;
适当降低离心力:离心力越高,蛋白与滤膜间的相互作用越强,膜吸附也越明显;
采用短时,多次离心的方式;在离心间隙对样品进行轻柔吹打重悬;
滤膜的摆放方向朝向离心机的轴心;
6、如果超滤管需要灭菌可以怎样处理?
购买到的超滤管是没有预先经过灭菌,去RNA酶和去内毒素处理的。
超滤管都是使用热封设计,不可以直接进行高压高温灭菌,可以使用70%乙醇浸泡3-5分钟后离心清洗,然后用超纯水清洗。
如果需要去除超滤管的RNA酶,建议用0.1% DEPC在37℃浸泡2小时,然后再用超纯水清洗。
如果需要去除超滤管的内毒素,可以尝试用0.5M NaOH清洗,然后用超纯水清洗。
7、蛋白在浓缩时出现了沉淀,怎么办?
蛋白浓缩时过快或者过度浓缩都有可能引起蛋白沉淀,这和每个蛋白本身的性质有关。
初次浓缩蛋白,可以选择多次离心摸索离心时间和参数,如果蛋白容易沉淀,在多次离心间隙对样品进行轻柔吹打后继续浓缩;
或者考虑降低离心力为推荐离心力的30%-50%;
或者改为截留分子量更大的超滤管;

独家优势
全管PP聚丙烯材质:持久耐用不易碎:
Omega改性聚醚砜膜:低蛋白吸附,回收率高,最高耐受1M NaOH清洗;
处理体积大:最高上样量20ml;
截留分子量全:1KD-300KD;
