RMC-6236的作用机制、优势及KRAS抑制剂研究检测技术
2026-06-10 来源:本站 点击次数:46一、研究背景：RAS突变癌症的临床困境与研发痛点
1.RAS突变的癌症危害与流行病学现状
RAS家族包含KRAS、NRAS、HRAS三大亚型，是人类肿瘤中突变频率最高的驱动基因之一，突变后会导致RAS蛋白持续处于激活状态RAS (ON)，不断传递增殖信号，促使癌细胞无限增殖、侵袭与转移。
2、传统RAS抑制剂的短板
过往RAS靶向药物主要靶向失活态RAS (OFF)，存在两大核心缺陷：
（1）靶点单一：仅依赖半胱氨酸残基实现共价结合，只能覆盖KRAS G12C，无法适配 G12D、G12V等主流突变；
（2）疗效受限：肿瘤内RAS蛋白大多以激活态RAS (ON) 存在，靶向失活态难以彻底阻断致癌信号，且易产生耐药性。
二、RMC-6236设计及作用原理
第一步：形成二元复合物。口服入胞后，RMC-6236通过非共价结合；与亲环素A（Cyclophilin A）形成分子胶；靶向激活态RAS。
第二步：组装三元复合物。重构后的二元复合物（RMC-6236+CypA）特异性识别GTP 结合的激活态RAS (ON)，三者稳定结合形成RAS (ON)-RMC-6236-CypA三元复合物。
第三步：阻断致癌信号。三元复合物依靠空间位阻效应，阻挡 RAS (ON) 与下游RAF 等效应蛋白结合，彻底切断MAPK增殖信号通路，抑制癌细胞增殖、存活与转移，最终发挥抗肿瘤作用。
三、RMC-6236机制优势
1、机制创新：非共价+分子胶，不依赖特定氨基酸残基。
2、靶点广谱：覆盖所有 RAS 亚型和热点突变。
3、作用彻底：直接阻断激活态 RAS 的下游信号传递。
图：RMC-6236设计原理
1、RAS（ON）与BRAF亲和力检测
TR-FRET技术检测亲和力。蛋白A与蛋白B之间的相互作用是通过使用Eu标记的抗Tag1抗体（TR-FRET供体）和 Accepter标记的抗Tag2抗体（TR-FRET受体）检测的。由于蛋白A与蛋白B结合介导供体抗体与受体抗体接近，供体抗体的激发会触发向受体抗体的荧光共振能量转移（FRET），使受体抗体特异性发射665nm波长的信号。该特定信号与蛋白A与蛋白B相互作用的程度成正比。该均相实验操作简单，无需洗涤步骤。
抗体：Eu Anti-Flag antibody （Cat.No. EUFLAG-1000）和 FR Streptavidin （Cat.No.FRSA-1000）
蛋白：KRAS Avi&His Tag Protein, Human(Load GDP/GMPPNP) （Cat.No. UA080001）和BRAF Flag Tag Protein,Human（Cat.No. UA080261）
2、RAS（ON）—RMC-6236—Cyclophilin A三元复合物检测
同样使用TR-FRET技术，在96/384浅孔板中加入4ul蛋白A，4ul蛋白B，2ul药物，10ul抗体混合溶液。室温孵育1h，使用酶标仪320nm激发，615和665nm 双波长读取。信号强度与三元复合物结合程度成正比关系。
TR-FRET抗体：Eu Anti-GST antibody （Cat.No. EUGST-1000）和 FR Anti-his antibody （Cat.No.FRHIS-1000）
蛋白：Cyclophilin A GST Tag Protein, Human（Cat.No. UA011249）和KRAS Avi&His Tag Protein, Human(Load GDP/GMPPNP) （Cat.No. UA080001）
表面等离子共振技术(Surface Plasmon Resonance, 简称SPR) 是一种以光学为基础的分析技术。SPR技术利用光发生全反射时消逝波与金属表面等离子波形成共振，导致反射光大幅度减弱。当入射光波长固定时，反射光的强度是入射角的函数，其中反射光强度最低时对应的入射角为共振角(Resonance Angle)。金属表面的介质的折射率非常敏感，当表面介质的属性改变或附着量改变时，共振角将不同。
简单来说SPR是根据金属表面结合的配体的量或是否结合配体产生不同的共振角，共振角的改变与Ligand-Analyte的数量成正比，以此确定配体与Analyte结合的状态和Ka(热力学亲和常数)。
优爱蛋白，可提供SPR服务，详情可见官网介绍https://www.ua-bio.com/detection.html
4、细胞水平磷酸化ERK检测
THUNDERTM TR-FRET时间分辨荧光共振能量转移是一种基于荧光共振能量转移（FRET，Fluorescence Resonance Energy Transfer）和时间分辨荧光（TRF,Time-Resolved Fluorescence）的技术，采用夹心法，检测胞内蛋白磷酸化水平和总蛋白水平。THUNDER™ Extreme Phospho-ERK1/2 (T202/Y204) TR-FRET Cell Signaling Kit （Cat.No.KIT-XTM-ERKP-500）
H358（5K、10K、20K或40K细胞/孔，重复三次）培养过夜，然后血清饥饿18小时。然后将细胞与抑制剂RMC-4550在37°C下孵育60 min。数据显示，用RMC-4550处理H358细胞可抑制ERK1/2在T202/Y204位点的基础磷酸化。
UA-Glo®Luminescent Cell Viability （Cat. UA070103）基于ATP依赖的荧光素酶（Luciferase）催化反应。荧光素酶在Mg2+存在下，以荧光素、ATP和O₂为底物，将化学能转化为光能。由于ATP是活细胞能量代谢的核心分子，其含量与活细胞数量呈线性正相关，因此发光强度可直接反映细胞活力。肿瘤细胞的活力检测，要考虑其成球的特性，建议使用裂解效果后更好的UA-Glo® 3D Luminescent Cell Viability（Cat. UA079011）。
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生化水平结合活性检测（蛋白） |
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产品名称 |
货号 |
规格 |
备注 |
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UA080261 |
100ug |
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UA011249 |
100ug |
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UA080001 |
100ug |
Load GDP/GMPPNP |
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UA080271 |
100ug |
Load GDP/GMPPNP |
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UA080002 |
100ug |
Load GDP/GMPPNP |
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UA080462 |
100ug |
Load GDP/GMPPNP |
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UA080401 |
100ug |
Load GDP/GMPPNP |
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UA080004 |
100ug |
Load GDP/GMPPNP |
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UA080003 |
100ug |
Load GDP/GMPPNP |
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UA080005 |
100ug |
Load GDP/GMPPNP |
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KRAS [G13C] Avi&His Tag |
UA080006 |
100ug |
Load GDP/GMPPNP |
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UA080007 |
100ug |
Load GDP/GMPPNP |
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UA080008 |
100ug |
Load GDP/GMPPNP |
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UA080520 |
100ug |
Load GDP/GMPPNP |
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UA080519 |
100ug |
Load GDP/GMPPNP |
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生化水平结合活性检测THUNDER™ TR-FRET 标签抗体 |
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TR-FRET 荧光供体 |
货号 |
TR-FRET 荧光受体 |
货号 |
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Eu-anti-6xHis |
FR-anti-6xHis |
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Eu-anti-FLAG |
FR-anti-FLAG |
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Eu-anti-GST |
FR-anti-GST |
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Eu-anti-V5 |
FR-anti-V5 |
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Eu-anti-human IgG |
FR-anti-human IgG |
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Eu-anti-mouse IgG |
FR-anti-mouse IgG |
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Eu-anti-rabbit IgG |
FR-anti-rabbit IgG |
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Eu-streptavidin |
FR-streptavidin |
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磷酸化蛋白检测 |
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产品名称 |
货号 |
规格 |
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Phospho-ERK1/2 (T202/Y204) |
KIT-XTM-ERKP-500 |
500 pionts |
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Total ERK |
KIT-ERKT-500 |
500 pionts |
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细胞活力检测 |
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产品名称 |
货号 |
规格 |
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UA-Glo® Luminescent Cell Viability |
UA070103 |
1000 ml |
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UA-Glo® 3D Cell Viability Assay |
UA079011 |
1000 ml |
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微孔板 |
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产品名称 |
货号 |
规格 |
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96浅孔板 |
abs7308 |
40块/箱 |
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384浅孔板 |
abs7311 |
50块/箱 |
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