▲ Vemurafenib (T2382)，CAS: 918504-65-1的化学结构式

Vemurafenib (T2382)，CAS: 918504-65-1 是一种选择性且高效的RAF激酶小分子抑制剂，对突变型B‑RAF(V600E)与C‑RAF（c‑RAF‑1）表现出纳摩尔级活性，其生化IC50分别约为31 nM与48 nM。通过占据RAF的ATP结合位点，Vemurafenib 抑制RAF节点的激酶活性，从而下调经典MAPK级联（RAF–MEK–ERK），在携带BRAF V600E驱动的细胞体系中引发MEK/ERK磷酸化下降、ERK依赖的转录输出减弱与增殖信号受抑的表型[1]。由于RAF位于受体酪氨酸激酶与RAS输入的汇聚点，该化合物可用于深入解析MAPK通路的拓扑结构、反馈与串扰。

RAF药理的一个关键特征是RAF亚型可二聚并在特定上游背景下发生互相激活。在RAS‑GTP高或BRAF野生型情形下，I型RAF抑制剂可促进RAF二聚并转激活未被抑制的同源体，尤以C‑RAF为主，导致特定基因型中出现“悖论性”ERK活化[2]。鉴于Vemurafenib对B‑RAF(V600E)强效且对C‑RAF亦具活性，且RAF信号具有二聚能力，它非常适合用于探究基因型依赖的信号输出、诱发悖论信号的条件以及抑制策略（如下游联合调控）。相应地，研究常以Vemurafenib校准p‑MEK/p‑ERK等生物标志物，并解析ERK调控引发的转录与代谢改变。

除核心RAF–MEK–ERK轴外，围绕Vemurafenib的研究亦常结合Src/ACK1相关通路节点（如ACK1/TNK2、MAP4K5/KHS1，以及FGR、SRMS等Src家族激酶）来评估Raf、MAPK、Src与ACK1网络间的交联。同时，因ERK活性与细胞应激反应耦联，研究者也利用Vemurafenib考察MAPK抑制与自噬程序的界面，将其作为解析适应性生存与联合干预节点的工具。综合而言，Vemurafenib用于确立BRAF V600E特异依赖、描绘反馈回路（如解除ERK负反馈后的上游再激活）、探究RAF亚型与二聚生物学，并评估与MEK/ERK、Src/ACK1或自噬通路的理性组合[1,2]。

■ 2. 文献分享
■ 2.1 Targeting PLK1-CBX8-GPX4 axis overcomes BRAF/EGFR inhibitor resistance in BRAFV600E colorectal cancer via ferroptosis

▲ CRISPR 全基因组筛选鉴定 GPX4 为 BRAF 抑制剂联合西妥昔单抗的协同致死靶点 (a) HT29 细胞 CRISPR 筛选实验流程，设置溶剂对照、单药 BRAFi、BRAFi 联合西妥昔单抗（Cet）处理组，经文库构建与二代测序（NGS）分析 sgRNA 丰度变化。 (b-c) β 得分散点图显示，GPX4 敲除在 BRAFi 单药、联合用药组均表现显著负向筛选效应，提示 GPX4 缺失可增强药物杀伤作用。 (d) 差异基因热图：BRAFi 单药及联合处理显著上调 GPX4 及铁死亡相关调控基因。 (e-f) 蛋白与 mRNA 定量验证：在 HT29、WiDr 两种 BRAF 突变结肠癌细胞中，LGX818（BRAFi）可剂量依赖性上调 GPX4 表达，联用西妥昔单抗进一步提升其表达水平。 (g) 细胞免疫组化证实，LGX818 处理后 GPX4 蛋白染色强度显著升高，联合用药组上调更明显。 (h) BRAF V600E 结直肠癌患者配对组织染色：治疗后肿瘤组织 GPX4 表达显著高于治疗前样本。

Vemurafenib (T2382) 在本研究中作为BRAFi + EGFRi既有组合中的BRAF抑制剂成分被考察。作者进一步评估抑制PLK1是否能够增强此类组合在BRAFV600E结直肠癌模型中的作用。证据显示，当在含有Vemurafenib的组合中加入PLK1抑制剂Onvansertib时，整体抑制效能得到提高，并在Vemurafenib与EGFR抑制剂共同配伍的两种情境下表现出协同效应：一是Vemurafenib与cetuximab的组合，二是Vemurafenib与erlotinib的组合。结果表明，Vemurafenib所构成的BRAFi + EGFRi组合对PLK1的并行抑制具有敏感性，Onvansertib的加入可在这些以Vemurafenib为核心的配伍中进一步增强抑制效果并产生协同。通过将Vemurafenib明确为上述基准组合中的BRAF靶向要素，并展示在并行PLK1抑制下效能与协同的提升，研究强调了以Vemurafenib为核心、联合EGFR抑制与PLK1抑制的多靶点配伍策略在所测试体系中的增强表现。[3]

■ 2.2 Vemurafenib inhibits necroptosis in normal and pathological conditions as a RIPK1 antagonist

▲维莫非尼的坏死性凋亡抑制活性筛选与验证 (A) FDA 获批药物筛选流程：以 TNFα 诱导细胞坏死性凋亡，筛选具有细胞保护作用的化合物。 (B) 初筛结果：维莫非尼（Vemurafenib）表现出强效坏死性凋亡抑制活性，效应接近阳性对照药 Nec-1。 (C-D) 细胞活力验证：维莫非尼可显著逆转 TSZ 诱导的 MDF、HT29 细胞坏死性凋亡，提升细胞存活率。 (E) 细胞形态观察：维莫非尼可改善 TSZ 诱导的细胞坏死形态，保护效果与阳性药 Nec-1 相当。 (F) 剂量效应曲线：维莫非尼呈剂量依赖性抑制坏死性凋亡，在 L929、MDF、HT29 细胞中 EC₅₀分别为 3.752、7.141、3.699 μM。 (G-H) 通路特异性验证：维莫非尼特异性抑制 TSZ 诱导的坏死性凋亡，对 TS 诱导的细胞凋亡无显著保护作用。

Vemurafenib (T2382) 被鉴定为一种强效抑制坏死性凋亡的化合物。研究显示，Vemurafenib 可通过直接结合阻断RIPK1的激酶活性，抑制下游信号与坏死小体装配，从而抑制坏死性凋亡。与Necrostatin-1相比，Vemurafenib 通过占据一个独特的变位疏水口袋，使RIPK1稳定于非活性的DLG-out构象，研究结果表明其为有效的RIPK1拮抗剂。分子对接进一步揭示，Vemurafenib 作为III型激酶抑制剂，结合于RIPK1活化环邻近的变位疏水口袋。在功能层面，Vemurafenib 预处理在体内对坏死性凋亡相关状况提供了强有力的保护。在LPS联合z-VAD诱导腹腔巨噬细胞发生坏死性凋亡的小鼠模型中，Vemurafenib 预处理减轻了巨噬细胞的丢失，提示其赋予巨噬细胞抵抗坏死性凋亡的能力。与此一致，炎性介质的升高被显著抑制：腹腔液中的TNFα与IL-6，以及血清中的TNFα、IL-6、IFN-γ与MCP-1在给予Vemurafenib 后均被阻断。机制方面，突变与稳定性实验支持其结合模式：Vemurafenib 有效抑制RIPK1的L70A与S161A突变体自磷酸化，并保护这些突变体免受蛋白酶降解、提升其热稳定性，与其将RIPK1稳定于非活性状态且具III型激酶抑制剂特征的结论一致。[4]

■ 2.3 In Silico Drug Repositioning Identifies SYK Kinase Inhibitors as Potential Neuroprotective Agents for Ataxia-Telangiectasia.

▲ 共晶配体与 GNINA 对接重现构象的比对验证 橙色为共晶结构中的原始配体构象，蓝色为 GNINA 对接重现的化合物结合构象；二者空间高度重合，验证该对接方法可准确重现化合物的结合姿态。

Vemurafenib (T2382) 在该研究的计算证据中被支持为作用于SYK并具备疾病网络相关性的候选化合物。研究将其列为最终入选的化合物之一，显示出在分子层面与SYK稳定且有利的相互作用，并在Ataxia‑Telangiectasia疾病模块中呈现统计学显著的拓扑关联，从而强化其再定位潜力。基于分子动力学的自由能景观分析显示，Vemurafenib复合物呈现受限且清晰的低能量盆地，指示配体结合状态的构象分布较为集中。与此一致，结果支持Vemurafenib对SYK催化口袋具有稳定化作用，并与活性位点区域在模拟过程中的低波动特征相吻合。综合这些热力学与动力学观察，作者指出该计算景观为Vemurafenib作为最可行的再定位候选之一提供了有力的结构学依据。整体而言，对接、分子动力学与网络层面的联合分析共同表明，Vemurafenib在SYK活性位点内维持稳固而持久的结合，并处于稳定的构象状态，从而支持其在研究所提出的后续验证路径中被优先考虑。[5]

■ 3. 结语
Vemurafenib通过占据RAF激酶的ATP结合位点，选择性抑制突变型B-RAF(V600E)及C-RAF，进而下调RAF–MEK–ERK信号通路。文献表明，Vemurafenib有效抑制BRAF V600E驱动的增殖信号，作为化学探针解析RAF二聚与悖论性ERK激活，及评估与Src/ACK1、自噬通路的交叉调控。研究还显示，Vemurafenib与EGFR抑制剂及PLK1抑制剂联合应用，在结直肠癌模型中表现出增强效能和协同作用。此外，Vemurafenib作为RIPK1拮抗剂，强效抑制坏死性凋亡，且计算模拟提示其具备作为SYK激酶抑制剂的再定位潜力，具有神经保护意义。未来研究可聚焦于优化含Vemurafenib的联合治疗方案，拓展其克服耐药的应用，以及在神经退行性疾病领域的验证与开发。

■ 4. Q&A
Q1: Vemurafenib的主要作用机制是什么？
A1: Vemurafenib通过占据RAF激酶的ATP结合位点，选择性抑制突变型B-RAF(V600E)及C-RAF，进而抑制RAF–MEK–ERK信号通路活性。

Q2: Vemurafenib如何在BRAFV600E结直肠癌模型中增强治疗效果？
A2: 在Vemurafenib与EGFR抑制剂联合方案中，加入PLK1抑制剂Onvansertib可提高整体抑制效能，并产生协同作用，增强对BRAFV600E结直肠癌的抑制效果。

Q3: 除了RAF抑制，Vemurafenib还有哪些重要的生物学活性？
A3: Vemurafenib作为强效RIPK1拮抗剂抑制坏死性凋亡，同时计算模拟支持其作为SYK激酶抑制剂的再定位潜力，具有神经保护功能。

■ 5. 参考文献
[1] Poulikakos PI, Zhang C, et al. RAF inhibitors transactivate RAF dimers and ERK signalling in cells with wild-type BRAF. Nature. 2010;464(7287):427-430.
[2] Chapman PB, Hauschild A, et al. Improved survival with vemurafenib in melanoma with BRAF V600E mutation. N Engl J Med. 2011;364(26):2507-2516.
[3] Zhao Z, He J, Qiu S, Wang L, Huangfu S, Hu Y, et al.. Targeting PLK1-CBX8-GPX4 axis overcomes BRAF/EGFR inhibitor resistance in BRAFV600E colorectal cancer via ferroptosis. Nature Communications. 2025;16(1):.
[4] Sun M, Ma X, Mu W, Li H, Zhao X, Zhu T, et al.. Vemurafenib inhibits necroptosis in normal and pathological conditions as a RIPK1 antagonist. Cell Death & Disease. 2023;14(8):.

[5] Romano A, Buccheri R, Zagni C, Rescifina A. In Silico Drug Repositioning Identifies SYK Kinase Inhibitors as Potential Neuroprotective Agents for Ataxia-Telangiectasia.. Chemical biology & drug design. 2026;108(1):e70354.