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SUTTER P1000拉制仪用于膜片钳的电极拉制技巧及参数设置

2022-10-31     来源:本站     点击次数:4798

根据前文介绍,初步拉制出一根玻璃电极后,就要根据其尖端形状及具体要求进一步精细调整参数以满足需求。
 

P1000调整的原理与P97相同,下图再次贴出供参考。
 


用于显微注射、胞内记录等的电极较为细长,通常会单步拉制,其PULL和VEL参数的值一般比较大,可以用上图直接调整。而用于膜片钳的电极相对比较短粗,一般选择多步拉制,此时参数的调整方法会略有不同。
 

主要介绍一下用于膜片钳的电极拉制技巧

 

这种电极一般会由3至5步进行拉制,步数越多,电极颈部越短,尖端也相对更粗,阻抗变小,需要根据具体情况来选择。此时我们会用VEL这项参数来控制具体的拉制步数,VEL通常会在20左右,根据铂金片、拉制仪及玻璃管体质不同也会略有变化,而PULL在这里会选择0
 

以4步拉制进行举例说明,Heat值通过Ramp测试进行确定,TIME(或DELAY)和PRESSURE暂按照CookBook中的推荐参数保持不变(详见上篇文章)。

 

假如VEL这次选择了25,拉制完成后未操作设备时,可以在屏幕下方看到结果提示。其中第一行表示该程序共循环了4次,第二行表示这次的电极在程序的第1行结束,因为这个程序一共只写了1行,所以这就代表本次拉制用了4步。
 


此时应该将VEL改为24,重新拉制,记录步数,并依次递减,直到有一个VEL使其步数变为5,假设该VEL为22。然后VEL再从25依次递增,直到有一个VEL使步数变为3,假设为26。那么能使该电极拉制步数为4的VEL分别有23、24、25,选择中间那个值即可,如果得到的VEL只有两个,则取较大那个值。


确定了VEL后,在程序中将4步分为4行分别设置出来,在P1000中,可以在Line这一项下面点击“x1”,将其修改为“x3”,如下图所示,表示这一行重复3次,然后在第二行按照第一行的参数抄上去,再根据上文表格中的调整方法对最后一行进行调整,最后一行的参数会直接影响电极尖端的形状,而前面3行主要影响颈部形状。在P97中,调整方法同理,只是P97需要将所有行全部写出,无法单独设置某行进行重复。
 


电极拉制参数的设置主要就是这些,更加详细的内容,比如各个参数的具体含义及更加精确的影响等细节部分可以阅读随包装附带的说明书和Cookbook进行了解。

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