RAW 264.7细胞培养攻略及常见问题解决方案
2023-01-10 来源:爱必信 点击次数:1765RAW 264.7细胞源自Abelson鼠科白血病病毒诱导的肿瘤；在正常培养中，细胞会出现多边形和不规则形状，并伴有许多伪足的生成，细胞贴壁能力超强。 RAW 264.7细胞属免疫细胞，有多种功能，是研究细胞吞噬、细胞免疫和分子免疫学的重要对象。呈不规则形，贴壁；细胞生长速度快，2-3天即可传一代；营养体系是DMEM+10%FBS。
表1 RAW 264.7细胞基本信息
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名称 |
RAW 264.7（小鼠单核巨噬细胞白血病细胞） |
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形态 |
不规则形 |
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生长特性 |
贴壁；细胞生长速度快，2-3天即可传一代 |
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营养体系 |
DMEM+10%FBS+1%PS |
图1 RAW 264.7（小鼠单核巨噬细胞白血病细胞）
首先我们讨论的第一大问题是胰酶消化对RAW264.7细胞的刺激分化。如图2所示：被胰酶消化过的RAW 264.7细胞表现出明显的分化现象呈多角形，有较长触角。
图2 分化的RAW 264.7（小鼠单核巨噬细胞白血病细胞）
图2 分化的RAW 264.7（小鼠单核巨噬细胞白血病细胞）
如何避免细胞传代因胰酶而受刺激分化，刮取是比较合适的方法。把细胞培养液倒掉，加入37℃遇温的PBS，然后刮细胞，食指和拇指夹紧细胞刮，细胞刮橡胶头刮面切面与平皿平行，用腕力轻轻刮（注意用腕力刮，不要用臂力），切记只能刮一次，不要来回刮和反复刮，吹打的力度一定要轻，切勿暴力吹打。
接下来我们讨论的第二种情况是为啥RAW 264.7换了血清批次后聚团严重？如图3所示：换血清批次后严重聚团的RAW 264.7细胞，呈片状分部，片层之间间隔明显。
图3 更换血清批次后严重聚团的RAW 264.7（小鼠单核巨噬细胞白血病细胞）
图3 更换血清批次后严重聚团的RAW 264.7（小鼠单核巨噬细胞白血病细胞）
如果您刚好也碰到这种情况，那不妨来了解一下血清批间差：血清来源于动物，其组成成分有1000种左右，且血清组成及含量常随供血动物的年龄、生理条件和营养条件而异。每个批号的组分百分比含量都是不固定的，所以批间差异是存在的。RAW 264.7细胞本身有聚团生长特性，但严重聚团可能受到血清里的某些因子刺激。
怎样预防血清批间差导致的细胞聚团呢？先用血清试用装，试用效果好，可购买和血清试用装批次相同的正装，囤积半年或一年的用量，有效避免批间差对细胞的影响（胎牛血清在-20℃保存可达5年）。
最后咱们讨论的第三大问题是有分化的细胞说明细胞状态不好吗？如图4所示，细胞群中有个别细胞出现触角。
图4 个别分化的RAW 264.7（小鼠单核巨噬细胞白血病细胞）
值得一提的是培养时，无法保证100% 不分化，通过传代可以将分化比例控制在一定范围。RAW264.7细胞生长速度快，2-3天即可传一代， 传代时间间隔超过3天更容易分化，很难吹下，每一次接种密度都要控制好。推荐传代比例为1：3—1：6；推荐传代时间：2—3天；推荐传代融合率：80%-90%
看了这么多长触角的细胞，我们来看看“马相”还不错的RAW 264.7细胞吧。如图5和图6所示，生长良好的RAW 即使融合度达到很高仍不分化，胞体边界感清晰，各个喂得圆鼓鼓、胖嘟嘟的，时刻准备着为人类生命科学研究而“献身”。
图5和图6 长势良好的RAW 264.7（小鼠单核巨噬细胞白血病细胞）
注：图源网络和客户，仅供参考学习用
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