必须在预实验中确定细胞系的正确接种浓度。根据您的细胞类型，用4-6x10 4细胞/ ml在2-3天内产生汇合的单层。

1.打开孔可移除腔室载玻片（ibidi，80841）包装，在无菌条件下。

2.像往常一样用胰蛋白酶消化并计数细胞。细胞浓度为5×104细胞/ ml MCF-7。

3. 将400微升细胞悬浮液加入腔室的每个孔中。避免摇晃，因为这会导致细胞分布不均匀。

4. 用配套的盖子盖住。在37°C和5％CO2下培养。细胞至少培养24小时，或直到建立融合的单层。

第2步：

固定是染色程序的第一步。目标是将细胞，细胞形成物或组织维持在其当前状态，并在较长时间内通过化学试剂保存。

1.小心地吸出细胞培养基。

2.用PBS洗两次。

3.加入400μl福尔马林溶液。

4.在室温下孵育30分钟。

5.小心吸入福尔马林溶液。

6.用PBS洗涤三次。

第3步：

应根据感兴趣的细胞结构选择染色试剂。在该方案中使用DAPI和DYE-490鬼笔环肽染色MCF-7细胞的细胞核和肌动蛋白骨架。

1.准备你的染色溶液：

· 聚苯硫醚

· DYE-490鬼笔环肽

· DAPI 1µg/ml

2.小心吸出PBS。

3.移取400μl染色溶液到每个孔中

4.在室温下避光孵育30分钟

第4步：

在染色后清洗你的样本会使背景信号降到最低   

1.小心地吸出染色溶液   

2.加入400μl缓冲液     

3.小心吸入缓冲液   

4.重复步骤2和步骤3一次

第5步：

从一个边部开始，用手或用镊子小心地取下硅胶垫圈。该步骤应以缓慢，稳定的进行，以避免损坏细胞层。

第6步：

完成染色程序后，必须在用显微镜成像之前封固样品。该步骤还防止样品脱水。

1.将载玻片侧面在干净的实验室湿巾上轻敲，从样品中去除多余的介质。

2.将封固剂涂在样品上。用24毫米x 60毫米的盖玻片覆盖安装的样品，小心地将盖玻片放到安装介质上，以避免夹住任何气泡。

第7步：显微观察

在可移除 8 孔腔室中免疫染色的 MCF-7 细胞的荧光显微镜检查。绿色：α-微管蛋白，红色：F-肌动蛋白（鬼笔环肽），蓝色：细胞核 (DAPI)。宽场荧光图像是用 20 倍物镜拍摄的。

免疫荧光实验实例

人眼的小梁网细胞，在 ibidi 8 Well Chamber 上培养，可移除。F-肌动蛋白丝显示为绿色；细胞核被 DAPI（蓝色）染色。图片由中国香港香港理工大学视光学院的 Samantha Shan 提供。

广州科适特科学仪器有限公司是德国ibidi公司在中国区合作伙伴

如果你感兴趣请和我们联系

电话：020-38102730  

服务QQ：501747125

邮箱：info@kosterscience.com

地址：广州市天河区体育西路骏汇大厦北塔140 D房

关注微信公众号及时获取最新资讯