肝癌模型Hep G2细胞培养的关键技术和常见问题解答
2025-07-14 来源:本站 点击次数:112
【细胞介绍】
Hep G2 [HEPG2] 是一种表现出上皮样形态的细胞系，是从一名患有肝癌的阿根廷 15 岁白人男性青年的肝细胞癌中分离出来的。该细胞分泌多种血浆蛋白：清蛋白、α2-巨球蛋白、血纤维蛋白溶酶原、铁传递蛋白等。该细胞系由Wistar研究所获得，是合适的转染宿主。表达标志物包括胰岛素;胰岛素样生长因子 II （IGF II）。
Hep G2细胞生长特性通常紧密连接成片状增殖，初期附着于培养瓶壁形成小岛状结构，后期可能出现多层堆积或悬浮状态。该细胞系因贴壁性强，常用于研究肝细胞功能及病毒模型。以下是中乔新舟拍摄的Hep G2细胞拍摄的在不同放大倍数下的图片：
4X
10X
20X
细胞名称：Hep G2人肝癌细胞
细胞别名：HEP-G2; Hep G2; HEP G2; Hep-G2; HEPG2
产品货号：ZQ0022
生长特性：贴壁生长
培养条件：87%MEM（含NEAA）（货号：ZQ-300）+10%进口胎牛血清（货号：ZQ500-S）+1% L-alanyl-L-glutamine（货号：CSP004）+1%丙酮酸钠（货号：CSP003）+1%双抗（货号：CSP006）
含血清完全培养基货号：ZM0022
无血清完全培养基货号：SFM0022
培养环境：95%空气，5%二氧化碳；37℃
【传代培养】
该细胞为贴壁生长：
1、细胞有脱落情况时，将培养液转移到无菌离心管中，离心（125g，3～5分钟）1000-1200rmp收集悬浮细胞（漂浮细胞少，可能无沉淀，大部分在管壁上）；轻柔去除培养基，等贴壁细胞消化收集在一起混匀接种。
2、贴壁细胞用PBS洗1~2次，每次3-5ml，添加1ml 胰酶（0.25% 含EDTA）到细胞瓶中，轻轻摇匀，使胰酶溶液铺满细胞表面，放入培养箱中。1-3min后取出到显微镜下观察，(若细胞无变化继续放入培养箱消化)一旦细胞变圆、轻拍瓶尾部大部分细胞开始脱落，当达到70-80%细胞漂浮脱落，立即加入5ml完全培养基(含10%FBS)中和。用移液管轻轻吹打6-8次，使细胞充分解离。
3、将细胞悬液转移到无菌离心管中，计数，离心收集细胞。用适量完全培养基重悬细胞沉淀，使细胞密度为每毫升0.6-2X105。将细胞悬液转至培养瓶中，静置于培养箱中。建议T25培养瓶添加5-7ml完全培养基，以后2-3天进行换液。
【细胞冻存】
1、细胞密度80%以上，活细胞百分率达95%以上时，将细胞按照以上步骤进行消化收集细胞沉淀进行冻存。
2、细胞沉淀用适量4°C冻存液（货号：CSP042）重悬， 建议一瓶T25细胞冻存一管（1ml/管），直接将分装好的细胞冻存管置于-80℃超低温冰箱中过夜，若需液氮长期保存，需先置于-80℃至少一天后方可转至液氮罐中。
NOTE:若不是我司冻存液请按照冻存液说明书操作，若是自配冻存液需梯度降温冻存(2-8℃，放置 40min:-20℃,放置 30min-60min，-80℃放置一天后转移至液氮保存)或使用程序降温盒降温后，再转移至液氮中保存。
【细胞复苏】
1、液氮取出的细胞放入干冰中转移至细胞房，提前准备好完全培养基，离心管等试剂和耗材。
2、冻管细胞在37°C水浴中迅速解冻（大约1-2分钟）。为了减少污染的可能性，保持冻管瓶盖在水浴液面之上。 一旦大部分内容物解冻，立即将冻管移出水浴，70%的乙醇消毒冻管外壁。
3、将内容物转移到含3-6mL完全培养基的离心管中，轻轻混匀，离心（125 g，3～5分钟）1000-1200rmp去除培养基， 管底细胞沉淀用手指弹松，再添加3ml完全培养基至离心管内混匀细胞并进行计数。
4、用适量完全培养基将细胞密度调整至0.6-2.0X105，转移至培养瓶中，再将瓶转移至培养箱中静置培养。T25培养瓶建议添加5-7ml完全培养基。当密度达到80%以上时传代。
【常见问题】
1、培养过程中细胞碎片较多怎么处理？
1）细胞内的黑色颗粒是细胞外分泌泡及细胞器折光，这个属于细胞自身特性，无法清除也无法改变，大部分细胞都会有这种现象，只是不同细胞颗粒多少有区别，细胞培养体系不适应、营养缺乏、渗透压异常等均可能导致细胞内颗粒增加，建议使用合适的培养条件。
2.）细胞外的黑色颗粒大部分是细胞碎片和细胞代谢产物，可以先吸走培养基后用PBS润洗清除，再加新的培养基继续培养。润洗不能清除的可以换液清洗后等细胞密度70-80%左右消化处理细胞，消化完成后加完全培养基终止消化，混匀细胞，收集细胞悬液900-1000rpm(约150g)离心3min，弃上清。再加5mL PBS重悬细胞，再离心后，用完全培养基重悬接种到新的培养皿。第二次PBS重悬是为了去除碎片，如果平时碎片比较少，传代时可以省略PBS重悬的步骤；如果碎片很多，建议PBS多洗几次。
2、空泡现象
HepG2细胞中常有空泡，这是该细胞正常特性，不影响细胞生长，无需担心。
3、细胞生长慢
培养条件适宜的情况下，在T25培养瓶中生长的HepG2细胞，以1:2传代后，培养2-3天可以到达80%汇合率。若细胞生长过慢甚至不生长，可将血清增加至15%-20%（不要超过20%），待细胞恢复生长速度后再将血清比例降低到10%。
细胞接种密度不可过低，否则生长非常缓慢。
4、细胞聚团或不贴壁
血清品牌和培养基pH是影响HepG2细胞贴壁性的关键因素。
通常HepG2细胞呈单层生长，但遇到不合适的血清细胞可能呈现聚集倾向，最终聚团且不易消化开；也可能贴壁性变弱，漂浮细胞变多。使用高质量低内毒素未灭活的胎牛血清，可以帮助细胞更好地贴壁及形成单层细胞。
pH过高过低都将影响细胞贴壁性，每天观察培养器皿中培养基的颜色，偏黄及时换液，偏紫时检查培养箱CO2供应是否正常，培养瓶是否透气，并及时换液。
5、漂浮细胞多
排除上文中提到的血清和pH对细胞贴壁的影响，传代或复苏后若有部分细胞漂浮，是正常现象，随着培养部分漂浮细胞会逐渐贴壁。漂浮细胞较多时不要扔，使用台盼蓝检查细胞活性，若大部分是活细胞，将这些细胞离心收集后重新接种至原瓶。增加血清量（总比例不超过20%）可以促进贴壁。
消化时需注意时间不能太长，第一次消化该细胞要摸索最佳时间。中和时轻柔吹打，控制吹打次数和力度，可有效减少传代后漂浮细胞。
6、有圆形细胞粘附在贴壁的单层细胞上
这在HepG2培养时是常见现象，这些细胞可能是尚未完全贴壁或者正处于分裂期的细胞，无需对此特殊处理。
【注意事项】：
1. Hep G2 [HEPG2]对培养条件要求较严格，特别是 pH 值和血清质量，否则可能影响细胞凝集数量，应使用高质量低内毒素，未灭火的胎牛血清，可以帮助圆形的细胞丛簇更好的贴壁及形成单层细胞。细胞内容易有空泡，特别是在融合时，这属于正常现象。
2. 该细胞部分团块生长，复苏后可能存在形态不典型的情况，经几次传代后，上皮细胞形态会更加典型。
3. 该细胞对血清质量较为敏感，我司建议您使用优质胎牛血清进行培养或选择订购我司配套MEM完全培养液。
4.另我司提供Hep G2无血清专用培养基，欢迎咨询订购。
【发表过的文献】
截至到2024年，引用中乔新舟该细胞发表过的文献总数72篇，总的影响因子467.07，最高影响因子27.5.数据如下：
下面列举了几篇代表性的文献，可以参考：
1.论文题目：Dienediamine: A safe surrogate for the herbicide paraquat
期刊： Molecular Plant 影响因子：27.5
2.论文题目：Photodegradation of carbon dots cause cytotoxicity
期刊：Nature Communications 影响因子：14.919
3.论文题目：Ubiquitin-specific protease 1 facilitates hepatocellular carcinoma progression by modulating mitochondrial fission and metabolic reprogramming via cyclin-dependent kinase 5 stabilization
期刊：CELL DEATH AND DIFFERENTIATION 影响因子：13.7
4.论文题目：Site-specific ubiquitination of VDAC1 restricts its oligomerization and mitochondrial DNA release in liver fibrosis
期刊：EXPERIMENTAL AND MOLECULAR MEDICINE 影响因子：12.8
5.论文题目：Accumulation of nanoplastics in human cells as visualized and quantified by hyperspectral imaging with enhanced dark-field microscopy
期刊： ENVIRONMENT INTERNATIONAL 影响因子：11.8
Hep G2 [HEPG2] 是一种表现出上皮样形态的细胞系，是从一名患有肝癌的阿根廷 15 岁白人男性青年的肝细胞癌中分离出来的。该细胞分泌多种血浆蛋白：清蛋白、α2-巨球蛋白、血纤维蛋白溶酶原、铁传递蛋白等。该细胞系由Wistar研究所获得，是合适的转染宿主。表达标志物包括胰岛素;胰岛素样生长因子 II （IGF II）。
Hep G2细胞生长特性通常紧密连接成片状增殖，初期附着于培养瓶壁形成小岛状结构，后期可能出现多层堆积或悬浮状态。该细胞系因贴壁性强，常用于研究肝细胞功能及病毒模型。以下是中乔新舟拍摄的Hep G2细胞拍摄的在不同放大倍数下的图片：
4X
10X
20X
细胞名称：Hep G2人肝癌细胞
细胞别名：HEP-G2; Hep G2; HEP G2; Hep-G2; HEPG2
产品货号：ZQ0022
生长特性：贴壁生长
培养条件：87%MEM（含NEAA）（货号：ZQ-300）+10%进口胎牛血清（货号：ZQ500-S）+1% L-alanyl-L-glutamine（货号：CSP004）+1%丙酮酸钠（货号：CSP003）+1%双抗（货号：CSP006）
含血清完全培养基货号：ZM0022
无血清完全培养基货号：SFM0022
培养环境：95%空气，5%二氧化碳；37℃
【传代培养】
该细胞为贴壁生长：
1、细胞有脱落情况时，将培养液转移到无菌离心管中，离心（125g，3～5分钟）1000-1200rmp收集悬浮细胞（漂浮细胞少，可能无沉淀，大部分在管壁上）；轻柔去除培养基，等贴壁细胞消化收集在一起混匀接种。
2、贴壁细胞用PBS洗1~2次，每次3-5ml，添加1ml 胰酶（0.25% 含EDTA）到细胞瓶中，轻轻摇匀，使胰酶溶液铺满细胞表面，放入培养箱中。1-3min后取出到显微镜下观察，(若细胞无变化继续放入培养箱消化)一旦细胞变圆、轻拍瓶尾部大部分细胞开始脱落，当达到70-80%细胞漂浮脱落，立即加入5ml完全培养基(含10%FBS)中和。用移液管轻轻吹打6-8次，使细胞充分解离。
3、将细胞悬液转移到无菌离心管中，计数，离心收集细胞。用适量完全培养基重悬细胞沉淀，使细胞密度为每毫升0.6-2X105。将细胞悬液转至培养瓶中，静置于培养箱中。建议T25培养瓶添加5-7ml完全培养基，以后2-3天进行换液。
【细胞冻存】
1、细胞密度80%以上，活细胞百分率达95%以上时，将细胞按照以上步骤进行消化收集细胞沉淀进行冻存。
2、细胞沉淀用适量4°C冻存液（货号：CSP042）重悬， 建议一瓶T25细胞冻存一管（1ml/管），直接将分装好的细胞冻存管置于-80℃超低温冰箱中过夜，若需液氮长期保存，需先置于-80℃至少一天后方可转至液氮罐中。
NOTE:若不是我司冻存液请按照冻存液说明书操作，若是自配冻存液需梯度降温冻存(2-8℃，放置 40min:-20℃,放置 30min-60min，-80℃放置一天后转移至液氮保存)或使用程序降温盒降温后，再转移至液氮中保存。
【细胞复苏】
1、液氮取出的细胞放入干冰中转移至细胞房，提前准备好完全培养基，离心管等试剂和耗材。
2、冻管细胞在37°C水浴中迅速解冻（大约1-2分钟）。为了减少污染的可能性，保持冻管瓶盖在水浴液面之上。 一旦大部分内容物解冻，立即将冻管移出水浴，70%的乙醇消毒冻管外壁。
3、将内容物转移到含3-6mL完全培养基的离心管中，轻轻混匀，离心（125 g，3～5分钟）1000-1200rmp去除培养基， 管底细胞沉淀用手指弹松，再添加3ml完全培养基至离心管内混匀细胞并进行计数。
4、用适量完全培养基将细胞密度调整至0.6-2.0X105，转移至培养瓶中，再将瓶转移至培养箱中静置培养。T25培养瓶建议添加5-7ml完全培养基。当密度达到80%以上时传代。
【常见问题】
1、培养过程中细胞碎片较多怎么处理？
1）细胞内的黑色颗粒是细胞外分泌泡及细胞器折光，这个属于细胞自身特性，无法清除也无法改变，大部分细胞都会有这种现象，只是不同细胞颗粒多少有区别，细胞培养体系不适应、营养缺乏、渗透压异常等均可能导致细胞内颗粒增加，建议使用合适的培养条件。
2.）细胞外的黑色颗粒大部分是细胞碎片和细胞代谢产物，可以先吸走培养基后用PBS润洗清除，再加新的培养基继续培养。润洗不能清除的可以换液清洗后等细胞密度70-80%左右消化处理细胞，消化完成后加完全培养基终止消化，混匀细胞，收集细胞悬液900-1000rpm(约150g)离心3min，弃上清。再加5mL PBS重悬细胞，再离心后，用完全培养基重悬接种到新的培养皿。第二次PBS重悬是为了去除碎片，如果平时碎片比较少，传代时可以省略PBS重悬的步骤；如果碎片很多，建议PBS多洗几次。
2、空泡现象
HepG2细胞中常有空泡，这是该细胞正常特性，不影响细胞生长，无需担心。
3、细胞生长慢
培养条件适宜的情况下，在T25培养瓶中生长的HepG2细胞，以1:2传代后，培养2-3天可以到达80%汇合率。若细胞生长过慢甚至不生长，可将血清增加至15%-20%（不要超过20%），待细胞恢复生长速度后再将血清比例降低到10%。
细胞接种密度不可过低，否则生长非常缓慢。
4、细胞聚团或不贴壁
血清品牌和培养基pH是影响HepG2细胞贴壁性的关键因素。
通常HepG2细胞呈单层生长，但遇到不合适的血清细胞可能呈现聚集倾向，最终聚团且不易消化开；也可能贴壁性变弱，漂浮细胞变多。使用高质量低内毒素未灭活的胎牛血清，可以帮助细胞更好地贴壁及形成单层细胞。
pH过高过低都将影响细胞贴壁性，每天观察培养器皿中培养基的颜色，偏黄及时换液，偏紫时检查培养箱CO2供应是否正常，培养瓶是否透气，并及时换液。
5、漂浮细胞多
排除上文中提到的血清和pH对细胞贴壁的影响，传代或复苏后若有部分细胞漂浮，是正常现象，随着培养部分漂浮细胞会逐渐贴壁。漂浮细胞较多时不要扔，使用台盼蓝检查细胞活性，若大部分是活细胞，将这些细胞离心收集后重新接种至原瓶。增加血清量（总比例不超过20%）可以促进贴壁。
消化时需注意时间不能太长，第一次消化该细胞要摸索最佳时间。中和时轻柔吹打，控制吹打次数和力度，可有效减少传代后漂浮细胞。
6、有圆形细胞粘附在贴壁的单层细胞上
这在HepG2培养时是常见现象，这些细胞可能是尚未完全贴壁或者正处于分裂期的细胞，无需对此特殊处理。
【注意事项】：
1. Hep G2 [HEPG2]对培养条件要求较严格，特别是 pH 值和血清质量，否则可能影响细胞凝集数量，应使用高质量低内毒素，未灭火的胎牛血清，可以帮助圆形的细胞丛簇更好的贴壁及形成单层细胞。细胞内容易有空泡，特别是在融合时，这属于正常现象。
2. 该细胞部分团块生长，复苏后可能存在形态不典型的情况，经几次传代后，上皮细胞形态会更加典型。
3. 该细胞对血清质量较为敏感，我司建议您使用优质胎牛血清进行培养或选择订购我司配套MEM完全培养液。
4.另我司提供Hep G2无血清专用培养基，欢迎咨询订购。
【发表过的文献】
截至到2024年，引用中乔新舟该细胞发表过的文献总数72篇，总的影响因子467.07，最高影响因子27.5.数据如下：
下面列举了几篇代表性的文献，可以参考：
1.论文题目：Dienediamine: A safe surrogate for the herbicide paraquat
期刊： Molecular Plant 影响因子：27.5
2.论文题目：Photodegradation of carbon dots cause cytotoxicity
期刊：Nature Communications 影响因子：14.919
3.论文题目：Ubiquitin-specific protease 1 facilitates hepatocellular carcinoma progression by modulating mitochondrial fission and metabolic reprogramming via cyclin-dependent kinase 5 stabilization
期刊：CELL DEATH AND DIFFERENTIATION 影响因子：13.7
4.论文题目：Site-specific ubiquitination of VDAC1 restricts its oligomerization and mitochondrial DNA release in liver fibrosis
期刊：EXPERIMENTAL AND MOLECULAR MEDICINE 影响因子：12.8
5.论文题目：Accumulation of nanoplastics in human cells as visualized and quantified by hyperspectral imaging with enhanced dark-field microscopy
期刊： ENVIRONMENT INTERNATIONAL 影响因子：11.8
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