一，内毒素检测（凝胶法）的原理

酶原 内毒素 凝固酶

凝固原 凝固酶 凝固素
 

革兰氏阴性细菌内毒素催化了LAL中酶原的活化。初始活化速率由内毒素的浓度决定。活化后的酶（凝固酶）水解了也存在于LAL中的凝血蛋白（凝固原）内的特定化合键。水解后，产生的凝固素自行联合，并形成凝胶状胶块。
 

凝胶法是一种用于革兰氏阴性细菌内毒素的限量测试。凝胶法在37℃的水浴或干燥热块中放置的试管中操作。孵育一小时后，将试管翻转180°。凝块牢固地附着在试管底部，表明是阳性反应。如果液体从试管侧面向下流动，则结果是内毒素阴性。
 

二，检测所需主要设备及材料

试剂

– 鲎试剂（LAL）（PYROGENT™ 试剂）

– 内毒素工作标准品（CSE）

– LAL 试剂检查用水（LRW）(# W50-640, W50-100, W50-500)

器具

– 玻璃稀释管，13 × 100 mm（# N207）

– 玻璃反应管，10 × 75 mm（# N201, N205）

– 独立包装的血清吸管（选购）

– 标签

请使用经内毒素试验验证合格的无热原器具。

设备

– 加热块或非循环热水浴

– 移液器

– 计时器

– 漩涡混合器

– 试管架

三，操作步骤

本指南分步描述了如何进行传统凝胶法 鲎试剂（以下简称LAL）试验。试验开始前，先使试剂瓶温度与室温相同。

四，注意事项

– 使用配套的LAL和CSE 试剂

– 建议勿使用塑胶管稀释内毒素

– 遵循所有关于内毒素漩涡震荡次数的建议

– 使用经内毒素试验验证合格的无热原器具

– 使用前，先使试剂温度与室温保持相同

– 不要对LAL进行漩涡震荡

– 不要污染样品、标准品、LRW 和器具

– 应正确安装、验证并维护设备仪器，避免影响凝胶形成