AGS为人胃腺癌细胞，分离自一例未接受治疗的 54 岁女性胃腺癌组织，呈上皮样形态、贴壁生长，倍增时间约20-24h，植板率约34%，是研究胃癌发病机制、幽门螺杆菌与胃上皮细胞互作、化疗及靶向药物筛选的经典人胃癌细胞系。该细胞贴壁牢固、增殖速度较快，需严格把控汇合度、合理安排传代节奏；另外该细胞携带5型副流感病毒（PIV5），所有操作均应在生物安全柜内规范开展。本文将针对 AGS细胞的培养流程进行梳理。
一、细胞复苏
1.【准备工作】配制完全培养基：Ham's F-12K（abs9563-500mL/SH30526.01）+10%FBS（abs972-500mL/SV30302.03）+1%P/S（abs9244-100ml/SV30010），取9mL于37℃预热。水浴锅预热至37℃；生物安全柜紫外照射30min。建议将装有完全培养基的培养瓶提前放入培养箱15min以上，使pH稳定在7.0-7.6后再接种。
2.【融化】从液氮取出冻存管，37℃水浴轻柔摇晃融化，约2min；融化期间保持管盖与O型圈在水面之上，减少污染风险。
3.【重悬】内容物融化后立即取出，70%乙醇擦拭或浸洗消毒外壁，此后全程严格无菌操作；将细胞悬液转入含9mL完全培养基的离心管中。
4.【离心】约125×g离心5-7min，弃上清，去除DMSO残留。
5.【重悬】加入1-2mL完全培养基轻轻吹打重悬；接种T25培养瓶（加入5-6mL完全培养基），十字混匀，标注名称、代次、日期。
6.【培养】放入37℃、5%CO₂培养箱静置培养,复苏后24h换液。
注意：AGS贴壁与铺展较快，复苏次日即可见典型上皮样单层；若密度已达70%-80%，次日即可安排首次传代。
二、细胞传代
1.【实验准备】配制完全培养基：Ham's F-12K（abs9563-500mL/SH30526.01）+10%FBS（abs972-500mL/SV30302.03）+1%P/S（abs9244-100ml/SV30010）。提前取出D-PBS（abs971-500ml/SH30028.02）与0.25%胰酶-EDTA（abs47047375-100mL/SH30042.01），恢复至室温；生物安全柜紫外照射30min。以下体积以T75瓶为准，其他规格按比例增减。
2.【镜检】汇合度70%-80%时传代（不要长满）；细胞呈上皮样、多边形、铺展成单层；倍增时间约20-24小时，通常2-3天需要传代一轮。推荐接种密度1×10⁴-2×10⁴个/cm²。
3.【细胞清洗】吸弃旧培养基，用D-PBS（abs971-500ml/SH30028.02）轻轻润洗细胞层1次，去除残留血清；沿瓶壁加入，避免直接冲刷细胞面。
4.【细胞消化】加入2-3mL胰酶-EDTA（abs47047375-100mL/SH30042.01）溶液覆盖瓶底，室温或37℃静置，镜下观察至细胞层分散，通常5-15min；难脱落的细胞可置于37℃促进分散。
注意：等待细胞脱落期间切勿敲击或摇晃培养瓶，否则细胞成团脱落、聚团，影响铺板均匀度与克隆形成实验。
5.【终止与收集】加入6-8mL完全培养基终止消化，轻轻吹打使细胞脱落并分散为单细胞悬液。
6.【离心】1000rpm离心5min，弃上清；加入完全培养基轻轻重悬。
7.【传代】按1:5-1:8的比例接种至新瓶（国内常规1:3-1:6亦可），补加完全培养基至工作体积，十字混匀，标注信息。
8.【镜检】镜下确认分散均匀后放入37℃、5%CO₂培养箱；换液每2-3天一次。
注意：AGS植板率约34%，低密度铺板时请适当提高接种密度或缩短传代间隔，避免因密度过低导致状态下滑。
三、细胞冻存
1.【准备工作】冻存液：完全培养基+5%（v/v）DMSO（abs9187-100mL）；如使用无血清细胞冻存液（abs9417-100mL）可省去程序降温步骤。冻存管标注名称、代次、冻存人、日期；安全柜紫外照射30min。
2.【细胞收集】取对数生长期、汇合度70%-80%的细胞，按传代步骤消化收集，离心后弃上清。
3.【细胞重悬】加入冻存液（约1mL/管）轻柔吹打重悬，细胞密度约2-5×10⁶/mL。
4.【冻存】每管1mL入冻存盒，-80℃过夜后转移至液氮气相长期保存。注意：-70℃存放会导致活力丧失，不可长期置于-80℃。
四、关键注意事项
1.培养基与血清
（1）标准配方为F-12K+10% FBS，是细胞库推荐体系；国内以DMEM高糖（abs9483-500ml/SV30303.01）或RPMI-1640（abs9484-500mL/SV30306.01）替代的方案亦有报道，但生长速率与形态会有差异；
（2）换用其他基础培养基前先做平行对比，首次培养建议严格按推荐体系；
（3）建议固定批号并使用优级胎牛血清（abs972-500mL/SV30302.03），批次更换后做生长曲线对比。
2.汇合度与传代节奏
（1）该细胞倍增快（约20-24小时），切勿长满后传代—过度汇合后消化变难、成团增多、状态下滑；
（2）推荐70%-80%汇合即传代，按1:5-1:8稀释（国内1:3-1:6亦可）；
（3）每周检查2-3次即可，但密度上升快，周五长到70%的瓶子周一很可能已经过满。
3.生物安全（PIV5）
（1）AGS细胞携带5型副流感病毒（PIV5），须在生物安全柜内规范操作、做好个人防护，废弃物按感染性废弃物处理；该病毒对多数培养实验无干扰，但涉及病毒学实验时须知晓其存在；
（2）生物安全等级为BSL-2，操作人员应接受相应培训；
（3）不得将AGS与其他细胞共用于同一安全柜内的开放操作，避免交叉污染。
4.形态与污染判断
（1）正常：上皮样、多边形、铺展成片，偶见拉长的梭形细胞混生，属正常异质性；
（2）异常：细胞变圆漂浮增多、颗粒增多—多为消化过度或状态下滑；
（3）异常：培养基浑浊、pH骤降—提示污染，须立即隔离处理。
5.实验相关提醒
（1）幽门螺杆菌共感染实验是该细胞的经典应用，共培养前确认细胞处于对数生长期、无抗生素残留干扰；
（2）涉及克隆形成、药敏实验时注意其植板率约34%，铺板密度需相应上调；
（3）该细胞在裸鼠体内有致瘤性，体内实验与废弃物的生物安全要求同BSL-2。
6.代次与质控
（1）建议使用低代次细胞开展关键实验，出现形态异常时及时复苏早期冻存；
（2）建议定期STR鉴定确认细胞身份，胃来源细胞系（AGS、MKN-45、HGC-27、SGC-7901等）易混淆；
（3）定期支原体检测。
参考资料
ATCC