免疫荧光染色故障排除方法操作详解
2022-08-24 来源:本站 点击次数:1982故障排除：
免疫荧光染色是一种非常敏感的方法，需要大量的经验和优化。说明中的微小变化可以显着改变结果。如果您收到低信号、无信号或高背景，请参阅以下故障排除建议。
高背景
| 原因 | 解决方案 |
| 不适当或过长的固定，导致伪影 | 减少固定时间或更换固定剂 |
| 封闭不足 | 延长孵育时间，考虑使用不同的封闭溶液（我们建议使用来自二抗宿主的血清） |
| 一抗无特异性 | 在所选模型系统中使用经证明可用于免疫荧光的一抗；如果可用，使用敲低/敲除样本作为阴性对照 |
| 一抗/二抗浓度过高、孵育时间过长、孵育温度过高 | 优化抗体浓度和孵育时间/温度，咨询制造商的协议 |
| 二抗的交叉反应 | 使用二抗的同种型对照来检查交叉反应性 |
| 洗得不够 | 验证所有洗涤步骤是否正确执行；如有必要，延长洗涤步骤 |
| 成像过程中的漂白 | 使用与适合您选择的显微镜技术的荧光团偶联的二抗 |
| 低信号强度，导致噪音 | 优化信噪比，例如，通过使用更亮的荧光团进行检测；如果适用，增加目标抗原的表达（例如，通过过表达或通过添加诱导剂） |
| 高自发荧光 | 使用未染色的对照检查样品的自发荧光；使用新鲜的固定溶液（过期的福尔马林溶液可能具有较高的自发荧光）；使用自发荧光低的材料（例如，ibidi µ-Slides或Chamber Slides）；使用自发荧光低的封固剂（例如，ibidi封固剂 / ibidi 封固剂与 DAPI） |
ibidi解决方案
具有用于倒置显微镜检查的盖玻片底部的 ibidi μ-Slides 和 μ-Dishes有多种几何形状可供选择，可满足您对免疫细胞化学的任何特定需求。所有免疫荧光染色步骤都可以直接在载玻片或培养皿中进行。
ibidi通道载玻片的几何形状非常适合精确交换少量中等量，这在免疫细胞化学染色过程中是必需的。此外，通道 µ-Slides 的盖玻片底部无需额外的盖玻片。
在 ibidi腔室载玻片中，带有可移除腔室的硅胶垫圈安装在标准载玻片上。载玻片非常适合长期储存装有盖玻片的样品。
低信号或无信
低信号或无信号
| 原因 | 解决方案 |
| 样品干燥 | 始终保持样品湿润 |
| 样品过度固定，导致表位损伤 | 减少固定时间或更换固定剂 |
| 透化方法不足 | 优化或跳过通透步骤 |
| 一抗不与感兴趣的抗原结合 | 在所选模型系统中使用经证明可用于免疫荧光的一抗；通过使用阳性对照检查抗体功能（例如，通过过表达或通过添加诱导剂） |
| 一抗/二抗稀释度太高、孵育时间太短、孵育温度太低 | 增加抗体浓度或孵育时间/温度；咨询制造商的协议 |
| 非常低或没有抗原表达 | 使用阳性对照（例如，过表达模型）；重新考虑你的实验系统 |
| 不适当的显微镜检测方法 | 使用更灵敏的图像采集方法；检查您使用的滤光片/激光设置；使用更亮的荧光团进行检测 |
广州科适特科学仪器有限公司是德国ibidi公司在中国区合作伙伴
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