图1. NanoBiT蛋白质相互作用系统概览。图像承蒙Promega提供。
图2. FKBP/FRB NanoBiT和NLS-FKBP/RRB NanoBiT的细胞内定位。
随后,我们使用IXplore Live for Luminescence显微成像系统对表达NanoBiT的HeLa细胞进行生物发光成像2。
为了定位细胞核,我们使用Hoechst33342对HeLa细胞进行了复染,并在同一显微镜上进行荧光成像(图3)。由于非靶向FKBP/FRB NanoBiT在整个细胞质中扩散,我们在整个HeLa细胞中都观察到了生物发光信号。
图 3. FKBP/FRB NanoBiT和NLS-FKBP/RRB NanoBiT的细胞内定位。
显微镜:IXplore Live for Luminescence显微镜系统2(图4)
相机:imagEM EM-CCD相机(Hamamatsu Photonics)
物镜:LUCPLFLN60XPH(图5)
成像透镜:0.35X
EM增益:1200
呋喃嗪浓度:1/200稀释
雷帕霉素最终浓度:30 nM
图4. IXplore Live for Luminescence显微镜系统
图5. LUCPLFLN60XPH及UPLFLN40XPH物镜
载体:NLS-FKBP-SmBiT/FRB-LgBit载体(各50 ng)
显微镜:IXplore Live for Luminescence显微镜系统2
相机:imagEM EM-CCD相机(Hamamatsu Photonics)
EM增益:1200
物镜:UPLFLN40XPH
成像透镜:0.35X
曝光时间:相衬50 ms/生物发光30 s/荧光100 ms
延时间隔:40 s
更多IXplore Live for Luminescence相关信息,请点击此处查阅。
本应用说明的作者是Taro Hayashi,Evident生物工程、高级光学生物工程、研究与开发研究员。
1.细胞核定位信号(我们使用了3倍重复细胞核定位信号)。
2.基于IXplore Live显微镜的生物发光成像系统。该系统是根据日本大阪大学长井教授、Tokai Hit., Co, Ltd.及Evident联合开发的成果设计的。这项工作是在日本科学技术振兴机构开发先进测量和分析系统的计划下完成的。
3.用于通过使用11个氨基酸肽标签(HiBiT)和大约18 kDa NanoLuc荧光素酶片段(LgBiT)的生物发光探测靶蛋白的HiBiT技术。
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