开始实验前要问的问题!

我应该使用哪种内皮细胞？

内皮细胞具有高度器官和组织特异性。由于这种异质性，不同内皮细胞类型的管形成时间不同。在计划实验时必须考虑到这一点。通常，低传代人脐静脉细胞 (HUVEC) 用于管形成测定。

可以应用的细胞类型的更多例子是：

• 原代牛主动脉内皮细胞 (BAOEC)

• 猪骨髓来源的内皮祖细胞 (EPC)

• 人主动脉内皮细胞 (HAEC)

• 人肺动脉内皮细胞 (HPAEC)

• 人冠状动脉内皮细胞 (HCAEC)

   

哪种细胞密度最适合我的实验？

确定正确的细胞数对于从管形成测定中获得最佳结果至关重要。细胞密度取决于细胞类型和细胞大小。在开始实际实验之前，我们建议在非抑制条件下播种多个细胞并对管形成进行成像。创建的管数最多的细胞密度将显示出最明显的物质效应，因此应该用于实验。请记住，细胞通常不会在凝胶基质上增殖。通常，我们建议每孔使用 5,000–10,000 个 HUVEC。

我应该使用哪种基质胶？

内皮细胞的管形成率取决于形成基底膜样细胞外基质 (ECM) 表面的凝胶的类型和成分，细胞在该表面上接种。市售有几种基底膜提取物，例如 Matrigel® 和 Cultrex®，它们均由 Engelbreth-Holm-Swarm (EHS) 小鼠肉瘤细胞分泌。在开始使用特定内皮细胞类型进行实验之前，我们建议测试几种基底膜物质并遵循已发布的说明。如果将在您的测定中测试促血管生成剂，则应使用减少生长因子的凝胶基质。此外，如果可能，在整个实验中使用同一批次。

实验中应包括哪些对照？

为了对您的结果进行正确的统计分析，包括阳性和阴性对照非常重要。作为阳性对照，在不使用任何抑制剂的情况下对您感兴趣的细胞系进行管形成测定。当在生长因子减少的 Matrigel® 上用饥饿培养基培养时，内皮细胞应在数小时内显示管的形成。作为阴性对照，可以使用不影响细胞活力的管形成抑制剂。

我的移液器工作准确吗？它们是否经常校准？

为避免在使用 µ-Slide 15 Well 3D 时形成凝胶基质的半月板，将 10 µl 的精确量移液至内孔至关重要。此外，正确细胞数的播种非常重要。因此，有必要使用经过校准且处于完美工作状态的移液器。我们建议用相应的凝胶润湿移液管尖端，然后使用这一尖端填充孔。

康宁Lambda EliteTouch移液器经过精心设计，可提供最高水平的舒适性，准确性和精确度。轻巧的结构，轮廓处理的手柄和4位数的计数器旨在确保舒适的移液，可提供试用。

血管生成载玻片刨面图
 

我应该在哪个时间范围内观察细胞？

管形成的持续时间取决于细胞类型和所使用的细胞外基质，应单独确定。通常，HUVEC 在 2-4 小时后已经形成管。24 小时后，细胞开始发生凋亡，这会导致与基质的分离和管子的破裂。

抑制剂随时间对管形成的影响。
 

我应该手动还是自动监控管的形成？

如果有活细胞成像设备，我们建议使用延时视频成像——尤其是在您不熟悉所用细胞类型的血管生成行为的情况下。在典型设置中，系统会在 24 小时内每 5-15 分钟自动拍摄一张照片。这使得能够精确监测管形成的进程，例如，在添加特殊物质之后。如果您已经知道管形成的大致时间范围，也可以在预期的感兴趣时间点手动拍照。

ibidi活细胞成像系统，直接在显微镜上提供生理环境，在血管生成分析和管形成分析期间实现活细胞成像

使用 ibidi Stage Top 孵育系统的活细胞成像显示血管生成测定中 HUVEC 的管形成。

Tube Formation FastTrack AI 图像分析软件，ibidi 为管形成分析的量化提供了一种省时的全自动解决方案。它包括循环计数、平均循环面积、平均管长度（每个循环）、总管长度和分支数的分析。

广州科适特科学仪器有限公司是德国ibidi公司在中国区合作伙伴

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