永生化人角质形成细胞HaCaT的培养复苏和常见问题解答
2025-07-21 来源:本站 点击次数:46
【细胞介绍】
HaCaT细胞是一种人永生化表皮细胞系，源自一位62岁患有黑色素瘤男性的病灶外围正常皮肤组织。这种细胞系在体外培养后自然转化，获得了永生化特性，能够无限期地增殖而不会自然凋亡。HaCaT细胞保留了正常皮肤细胞的特性和功能，表达角蛋白、角化细胞交联外膜蛋白以及中间丝相关蛋白，这些蛋白在角质形成和皮肤细胞分化中起着重要的作用。HaCaT细胞因其在体外分化和增殖的高能力而被用于人表皮细胞角化的研究，并解决了培养寿命短和细胞系之间可能遇到的变异等问题。此外，它们也被广泛应用于皮肤生物学、免疫学、药物毒性研究、皮肤疾病研究、化妆品和药物测试等领域。
以下是中乔新舟拍摄的HaCaT细胞拍摄的在不同放大倍数下的图片：
4X
10X
20X
细胞名称：Hacat人永生化表皮细胞
细胞别名：HaCAT; HACAT; Hacat
产品货号：ZQ0044
生长特性：贴壁生长
培养条件：90%DMEM高糖（品牌：中乔新舟 货号：ZQ-100）+10%FBS（品牌：中乔新舟 货号：ZQ0500）+1%双抗（中乔新舟 货号：CSP006）
完全培养基货号：ZM0044
培养环境：95%空气，5%二氧化碳；37℃
【传代培养】
1、细胞有脱落情况时，将培养液转移到无菌离心管中，离心（125g，3～5分钟）1000-1200rmp收集悬浮细胞（漂浮细胞少，可能无沉淀，大部分在管壁上）；轻柔去除培养基，等贴壁细胞消化收集在一起混匀接种。
2、贴壁细胞用PBS洗1~2次，每次3-5ml，添加1ml 胰酶（0.25% 含EDTA）到细胞瓶中，轻轻摇匀，使胰酶溶液铺满细胞表面，放入培养箱中。1-3min后取出到显微镜下观察，(若细胞无变化继续放入培养箱消化)一旦细胞变圆、轻拍瓶尾部大部分细胞开始脱落，当达到70-80%细胞漂浮脱落，立即加入5ml完全培养基(含10%FBS)中和。用移液管轻轻吹打6-8次，使细胞充分解离。
3、将细胞悬液转移到无菌离心管中，计数，离心收集细胞。用适量完全培养基重悬细胞沉淀，使细胞密度为每毫升0.6-2X105。将细胞悬液转至培养瓶中，静置于培养箱中。建议T25培养瓶添加5-7ml完全培养基，以后2-3天进行换液。
【细胞冻存】
1、细胞密度80%以上，活细胞百分率达95%以上时，将细胞按照以上步骤进行消化收集细胞沉淀进行冻存。
2、细胞沉淀用适量4°C冻存液（货号：CSP042）重悬， 建议一瓶T25细胞冻存一管（1ml/管），直接将分装好的细胞冻存管置于-80℃超低温冰箱中过夜，若需液氮长期保存，需先置于-80℃至少一天后方可转至液氮罐中。
NOTE:若不是我司冻存液请按照冻存液说明书操作，若是自配冻存液需梯度降温冻存(2-8℃，放置 40min:-20℃,放置 30min-60min，-80℃放置一天后转移至液氮保存)或使用程序降温盒降温后，再转移至液氮中保存。
【细胞复苏】
1、液氮取出的细胞放入干冰中转移至细胞房，提前准备好完全培养基，离心管等试剂和耗材。
2、冻管细胞在37°C水浴中迅速解冻（大约1-2分钟）。为了减少污染的可能性，保持冻管瓶盖在水浴液面之上。 一旦大部分内容物解冻，立即将冻管移出水浴，70%的乙醇消毒冻管外壁。
3、将内容物转移到含3-6mL完全培养基的离心管中，轻轻混匀，离心（125 g，3～5分钟）1000-1200rmp去除培养基， 管底细胞沉淀用手指弹松，再添加3ml完全培养基至离心管内混匀细胞并进行计数。
4、用适量完全培养基将细胞密度调整至0.6-2.0X105，转移至培养瓶中，再将瓶转移至培养箱中静置培养。T25培养瓶建议添加5-7ml完全培养基。当密度达到80%以上时传代。
【常见问题】
1、细胞贴壁困难
确保培养基预热至37°C；
使用胶原蛋白涂层的培养皿或培养瓶，以提高细胞贴壁能力；
轻轻吹打细胞悬液，确保细胞均匀分布。
2.细胞增殖速度慢
确保培养基中胎牛血清(FBS)的质量和浓度(10%)；
检查二氧化碳浓度和培养温度是否恒定在5%和37°C；
检查培养基是否新鲜和正确配制，避免使用长时间储存的培养基。
3、细胞形态异常:如变圆或收缩
检查胰蛋白酶消化时间是否过长，适当缩短消化时间；
确保培养基中的营养成分充足；
检查培养环境的pH值和渗透压是否适宜。
4、细胞传代时死亡率高
避免过度胰蛋白酶消化，使用适量的胰蛋白酶并及时终止消化；
使用温和的细胞离心速度(150-250g，2-5分钟)；
传代时避免细胞过度稀释，保持适当的细胞密度。
5、细胞内黑点和碎片多
更换新鲜的培养基，避免细胞过度生长导致碎片增加；
传代时轻轻吹打细胞悬液，避免细胞损伤。
6、培养基中有大量漂浮细胞
检查细胞是否过度消化或处理不当，调整操作步骤；
定期换液清除漂浮细胞，保证贴壁细胞的健康生长。
【注意事项】
该细胞传代时需要消化较长时间（5~15分钟），具体时间因胰酶浓度、效价、消化条件有所不同，请以细胞即将脱落为准。
难消化细胞可采用分步消化：
① 准备一个无菌的 15ml 离心管，加入 2ml 含 10%FBS 的完全培养基；
② 将消化下来的细胞吸入①中的离心管内中和（避免吹打）；
③ 向之前消化的培养瓶中加入 1ml 胰酶继续消化 2min 左右，轻拍培养瓶，95%左右细胞脱落后加入 2ml 含 10%FBS 的完全培养基中和，中和后的细胞悬液移入①中的离心管内。
【发表过的文献】
截至到2024年，引用中乔新舟该细胞发表过的文献总数45篇，总的影响因子227.87，最高影响因子27.4数据如下：
下面列举了几篇代表性的文献，可以参考：
1.论文题目：LysSYL-Loaded pH-Switchable Self-Assembling Peptide Hydrogels Promote Methicillin-Resistant Staphylococcus Aureus Elimination and Wound Healing
期刊： ADVANCED MATERIALS 影响因子：27.4
2.论文题目：Dynamic Imine Chemistry Enables Paintable Biogel Electrolytes to Shield On-Body Zinc-Ion Batteries from Interfacial Interference
期刊：Journal of the American Chemical Society 影响因子：14.4
3.论文题目：Hydrogel-Based Treatment of House Dust Mite-Induced Atopic Dermatitis through Triple Cleaning of Mites, Bacteria, and ROS-Related Inflammation
期刊：ACS Applied Materials & Interfaces 影响因子：8.3
4.论文题目：Skin-adaptive film dressing with smart-release of growth factors accelerated diabetic wound healing
期刊：INTERNATIONAL JOURNAL OF BIOLOGICAL MACROMOLECULES
影响因子：8.025
5.论文题目：INTERNATIONAL JOURNAL OF BIOLOGICAL MACROMOLECULES
期刊：BIOMEDICINE & PHARMACOTHERAPY 影响因子：7.5
HaCaT细胞是一种人永生化表皮细胞系，源自一位62岁患有黑色素瘤男性的病灶外围正常皮肤组织。这种细胞系在体外培养后自然转化，获得了永生化特性，能够无限期地增殖而不会自然凋亡。HaCaT细胞保留了正常皮肤细胞的特性和功能，表达角蛋白、角化细胞交联外膜蛋白以及中间丝相关蛋白，这些蛋白在角质形成和皮肤细胞分化中起着重要的作用。HaCaT细胞因其在体外分化和增殖的高能力而被用于人表皮细胞角化的研究，并解决了培养寿命短和细胞系之间可能遇到的变异等问题。此外，它们也被广泛应用于皮肤生物学、免疫学、药物毒性研究、皮肤疾病研究、化妆品和药物测试等领域。
以下是中乔新舟拍摄的HaCaT细胞拍摄的在不同放大倍数下的图片：
4X
10X
20X
细胞名称：Hacat人永生化表皮细胞
细胞别名：HaCAT; HACAT; Hacat
产品货号：ZQ0044
生长特性：贴壁生长
培养条件：90%DMEM高糖（品牌：中乔新舟 货号：ZQ-100）+10%FBS（品牌：中乔新舟 货号：ZQ0500）+1%双抗（中乔新舟 货号：CSP006）
完全培养基货号：ZM0044
培养环境：95%空气，5%二氧化碳；37℃
【传代培养】
1、细胞有脱落情况时，将培养液转移到无菌离心管中，离心（125g，3～5分钟）1000-1200rmp收集悬浮细胞（漂浮细胞少，可能无沉淀，大部分在管壁上）；轻柔去除培养基，等贴壁细胞消化收集在一起混匀接种。
2、贴壁细胞用PBS洗1~2次，每次3-5ml，添加1ml 胰酶（0.25% 含EDTA）到细胞瓶中，轻轻摇匀，使胰酶溶液铺满细胞表面，放入培养箱中。1-3min后取出到显微镜下观察，(若细胞无变化继续放入培养箱消化)一旦细胞变圆、轻拍瓶尾部大部分细胞开始脱落，当达到70-80%细胞漂浮脱落，立即加入5ml完全培养基(含10%FBS)中和。用移液管轻轻吹打6-8次，使细胞充分解离。
3、将细胞悬液转移到无菌离心管中，计数，离心收集细胞。用适量完全培养基重悬细胞沉淀，使细胞密度为每毫升0.6-2X105。将细胞悬液转至培养瓶中，静置于培养箱中。建议T25培养瓶添加5-7ml完全培养基，以后2-3天进行换液。
【细胞冻存】
1、细胞密度80%以上，活细胞百分率达95%以上时，将细胞按照以上步骤进行消化收集细胞沉淀进行冻存。
2、细胞沉淀用适量4°C冻存液（货号：CSP042）重悬， 建议一瓶T25细胞冻存一管（1ml/管），直接将分装好的细胞冻存管置于-80℃超低温冰箱中过夜，若需液氮长期保存，需先置于-80℃至少一天后方可转至液氮罐中。
NOTE:若不是我司冻存液请按照冻存液说明书操作，若是自配冻存液需梯度降温冻存(2-8℃，放置 40min:-20℃,放置 30min-60min，-80℃放置一天后转移至液氮保存)或使用程序降温盒降温后，再转移至液氮中保存。
【细胞复苏】
1、液氮取出的细胞放入干冰中转移至细胞房，提前准备好完全培养基，离心管等试剂和耗材。
2、冻管细胞在37°C水浴中迅速解冻（大约1-2分钟）。为了减少污染的可能性，保持冻管瓶盖在水浴液面之上。 一旦大部分内容物解冻，立即将冻管移出水浴，70%的乙醇消毒冻管外壁。
3、将内容物转移到含3-6mL完全培养基的离心管中，轻轻混匀，离心（125 g，3～5分钟）1000-1200rmp去除培养基， 管底细胞沉淀用手指弹松，再添加3ml完全培养基至离心管内混匀细胞并进行计数。
4、用适量完全培养基将细胞密度调整至0.6-2.0X105，转移至培养瓶中，再将瓶转移至培养箱中静置培养。T25培养瓶建议添加5-7ml完全培养基。当密度达到80%以上时传代。
【常见问题】
1、细胞贴壁困难
确保培养基预热至37°C；
使用胶原蛋白涂层的培养皿或培养瓶，以提高细胞贴壁能力；
轻轻吹打细胞悬液，确保细胞均匀分布。
2.细胞增殖速度慢
确保培养基中胎牛血清(FBS)的质量和浓度(10%)；
检查二氧化碳浓度和培养温度是否恒定在5%和37°C；
检查培养基是否新鲜和正确配制，避免使用长时间储存的培养基。
3、细胞形态异常:如变圆或收缩
检查胰蛋白酶消化时间是否过长，适当缩短消化时间；
确保培养基中的营养成分充足；
检查培养环境的pH值和渗透压是否适宜。
4、细胞传代时死亡率高
避免过度胰蛋白酶消化，使用适量的胰蛋白酶并及时终止消化；
使用温和的细胞离心速度(150-250g，2-5分钟)；
传代时避免细胞过度稀释，保持适当的细胞密度。
5、细胞内黑点和碎片多
更换新鲜的培养基，避免细胞过度生长导致碎片增加；
传代时轻轻吹打细胞悬液，避免细胞损伤。
6、培养基中有大量漂浮细胞
检查细胞是否过度消化或处理不当，调整操作步骤；
定期换液清除漂浮细胞，保证贴壁细胞的健康生长。
【注意事项】
该细胞传代时需要消化较长时间（5~15分钟），具体时间因胰酶浓度、效价、消化条件有所不同，请以细胞即将脱落为准。
难消化细胞可采用分步消化：
① 准备一个无菌的 15ml 离心管，加入 2ml 含 10%FBS 的完全培养基；
② 将消化下来的细胞吸入①中的离心管内中和（避免吹打）；
③ 向之前消化的培养瓶中加入 1ml 胰酶继续消化 2min 左右，轻拍培养瓶，95%左右细胞脱落后加入 2ml 含 10%FBS 的完全培养基中和，中和后的细胞悬液移入①中的离心管内。
【发表过的文献】
截至到2024年，引用中乔新舟该细胞发表过的文献总数45篇，总的影响因子227.87，最高影响因子27.4数据如下：
下面列举了几篇代表性的文献，可以参考：
1.论文题目：LysSYL-Loaded pH-Switchable Self-Assembling Peptide Hydrogels Promote Methicillin-Resistant Staphylococcus Aureus Elimination and Wound Healing
期刊： ADVANCED MATERIALS 影响因子：27.4
2.论文题目：Dynamic Imine Chemistry Enables Paintable Biogel Electrolytes to Shield On-Body Zinc-Ion Batteries from Interfacial Interference
期刊：Journal of the American Chemical Society 影响因子：14.4
3.论文题目：Hydrogel-Based Treatment of House Dust Mite-Induced Atopic Dermatitis through Triple Cleaning of Mites, Bacteria, and ROS-Related Inflammation
期刊：ACS Applied Materials & Interfaces 影响因子：8.3
4.论文题目：Skin-adaptive film dressing with smart-release of growth factors accelerated diabetic wound healing
期刊：INTERNATIONAL JOURNAL OF BIOLOGICAL MACROMOLECULES
影响因子：8.025
5.论文题目：INTERNATIONAL JOURNAL OF BIOLOGICAL MACROMOLECULES
期刊：BIOMEDICINE & PHARMACOTHERAPY 影响因子：7.5
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