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荧光曲线:免疫荧光中样本反应时间对荧光曲线和结果的影响

2023-05-05     来源:本站     点击次数:1593

免疫荧光中样本反应时间对荧光曲线和结果的影响
 

我们本次试验选取抗原类项目(猫瘟)、炎症类项目(CRP)在不同展板时间时检测的荧光曲线和结果,并对检测的荧光曲线和结果进行分析,进而判断反应时间对荧光曲线和结果的影响。
 

试验一:

取来自同一只猫(猫瘟阳性)的三个粪便样本,粪便量依次从少到多,加入稀释液中,进行十次颠倒混匀后,静置3min,静置完成后,滴加4滴稀释后的样本液于加样孔中,同时加入阴性对照组(加同等量的稀释液),本次试验采用外部展板(快速检测)模式,分别取1-10分钟的荧光曲线和检测结果,观察展板时间对荧光曲线和结果的影响。


从试验结果可以看出,在展板未充分时,对于荧光曲线图和结果会产生很大影响,可能会造成阴阳性的误判,当展板充分后,检测结果的重复性非常好,所以我们推荐使用内部展板模式进行检测。
若检测标本为粪便或肛拭子,若加入的样本量过多,会导致滴加样本时的杂质过多,造成展板时间过长或展板不充分的问题,会报错“无效检测卡”或出现异常曲线。因此我们取适量粪便或肛拭子样本后,应再混匀后进行静置,取上清液进行检测。


试验二:

取来自一只CRP检测阳性犬的血液样本,将血液样本颠倒混匀后,用一次性定量管取10uL血液,毛细管伸入稀释液面以下,轻捏吸气气囊,来回清洗毛细管2-3次,清洗完成后,颠倒混匀样本,取100uL样本液于加样孔中,同时加入阴性对照组(加100uL的稀释液),本次试验采用外部展板(快速检测)模式,分别取1-3分钟的荧光曲线和检测结果,观察展板时间对荧光曲线和结果的影响。


从试验结果可以看出,对于抗体或炎症类的检测项目,在展板不充分时,也会对结果造成很大影响,从而影响我们对疾病的诊断。
从本次试验我们不难看出,我们的荧光检测结果,不仅与动物本身的疾病状况有关,也与我们检测时加样量的多少(粪便量过多导致展板异常)、展板时间(展板时间不足影响检测结果)有密切关系。推荐大家选择内部展板模式进行免疫荧光检测。

 

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