基因医疗临床试验载体使用情况

截止2023年1月，与此相关的全球上市细胞与基因治疗产品共计26项，慢病毒载体8项，腺相关病毒6项，腺病毒6项，逆转录病毒3项，单纯疱疹病毒2项，埃可病毒1项。临床项目中，以AAV为载体的基因治疗试验数量呈现迅猛增长之势，在 ClinicalTrials.gov登记的以AAV为载体的基因治疗临床试验从2016年的不足10个增至2018年11月的145个，再到2022年6月进一步提升至 239个。

病毒载体生产工艺

病毒载体生产需要稳健的工艺流程，且工艺可进行全面放大并符合法规要求。

上游工艺是得到数量充足，包装完整病毒颗粒的过程，常见细胞主要有3种：基于人胚胎肾细胞HEK293的三质粒转染系统；基于夜蛾昆虫细胞(Sf9)的杆状病毒表达载体系统；哺乳动物稳定细胞系等。细胞复苏和DMSO去除后进入细胞培养阶段，通过控制pH，DO，培养温度等参数在培养基体系内得到适宜密度的细胞。在质粒转染阶段，控制质粒总量，转染试剂/质粒质量比，细胞密度等相关工艺参数，在完成病毒包装后进行收获。

下游工艺是去除杂质和病毒载体浓缩，由于每种载体产品的特性不同，例如空壳/完整衣壳比例，滴度，吸附特性，聚集特性等，不可能开发一种通用工艺。典型步骤：细胞收获液裂解后经澄清去除细胞碎片和颗粒物类杂质，需要考虑过滤器孔径，载量，流速的参数，核酸酶消化进行酶切反应以去除宿主DNA或转染残留的质粒DNA，由于上游收获的体积较大，通过超滤浓缩减少工作体积，并且要防止产物聚集；病毒载体在层析阶段可能用到离子交换层析，亲和层析或凝胶层析，需要充分考虑目标产品的特性进行工艺选择；最后超滤再进行浓缩换液，除菌过滤和灌装。