免疫沉淀(Immunoprecipitation),又被称为IP,是一种利用抗体与抗原之间的特异性结合,以及细菌蛋白质的“protein A/G”与抗体FC片段的结合特性开发出的技术。简而言之,抗原与抗体之间的关系就像是一把钥匙对应一把锁,而“protein A/G”则像是一条钥匙链,能够帮助我们快速找到对应的钥匙(抗体)。
CoIP、CHIP和RIP这些技术之间的差异主要在于与抗体结合的物质。
CoIP中的B代表蛋白质,CHIP中的B代表DNA,而RIP中的B则代表RNA。
1、CoIP技术
CoIP技术利用抗体的特异性反应来纯化和富集目标蛋白质。
具体流程如下:先将抗体与细胞裂解液或表达上清中的相应蛋白结合,再与蛋白A/G偶联的琼脂糖或Sepharose珠子进行孵育。通过离心,我们可以得到一个包含珠子、蛋白A/G、抗体和目标蛋白的复合物(如果使用MagBeads,则可以通过磁力进行分离)。在高温和还原剂的作用下,抗原与抗体分离,收集上清液,其中包含抗体、目标蛋白和一些杂蛋白。
2、CHIP技术
CHIP技术的原理则是利用抗原A与DNA B的结合,通过纯化分析结合后的目的DNA片段,来获取蛋白质与DNA相互作用的信息。
具体流程与CoIP类似:先将抗体与细胞裂解液或表达上清中的相应蛋白结合,再与蛋白A/G偶联的琼脂糖或Sepharose珠子进行孵育。通过离心,我们可以得到一个包含珠子、蛋白A/G、抗体和目标蛋白的复合物(如果使用MagBeads,则可以通过磁力进行分离)。在高温和还原剂的作用下,抗原与抗体分离,收集上清液,其中包含抗体、目标蛋白和一些杂蛋白。
3、RIP技术
RIP技术的基本原理是利用抗原A与RNA B的结合,通过对目标RNA片段进行纯化分析,来获取RNA与蛋白质相互作用的详细信息。
具体流程如下:首先,将抗体与细胞裂解液或表达上清液中的相应蛋白质结合。接着,将这一混合物与蛋白A/G偶联的琼脂糖或Sepharose珠子进行孵育。通过离心,我们可以获得一个珠子-蛋白A/G-抗体-目标蛋白质的复合物(如果使用MagBeads,则可以通过磁力分离得到这一复合物)。在高温和还原剂的作用下,抗原与抗体分离,收集上清液。上清液中包括抗体、目标蛋白质和少量其他蛋白质。
4、NEST产品应用
 |
 |
细胞消化与解离试剂 |
平衡盐溶液 |
NEST耗材
 |
 |
细胞培养瓶 |
细胞培养皿 |
 |
 |
离心管 |
移液吸头 |