可消化和抗性淀粉检测K-DSTRS的原理和操作步骤
2025-03-26 来源:本站 点击次数:325
可消化和抗性淀粉检测（40次检测）K-DSTRS
简介：
专业用语，快速消化淀粉（RDS）、缓慢消化淀粉（SDS）和 Englyst1等人于1992年引入了抗淀粉酶淀粉（RS），以反映 体内淀粉消化率。他们的工作，以及Wahlquist2等人的工作，Jenkins等人3 其他研究表明，食物的生理形态和淀粉的性质是 淀粉消化速率的主要决定因素。在这段时间里，它 研究还表明，“可消化”淀粉可以同时水解和吸收 作为单糖，但有些淀粉在人体内难以消化 肠。Englyst等人。4 在他们的研究中首次观察到抗淀粉酶淀粉（RS）开发了一种非淀粉多糖（NSP）的测量方法。这些作者认为NSP是膳食纤维（DF）的最佳测量方法，因此所有淀粉都是在NSP的测量中溶解（使用DMSO）并水解去除。最近，食品法典委员会5发布了膳食纤维的定义包括耐消化淀粉（RS）和是否纳入不易消化淀粉的决定低聚糖（NDO）留给各个国家。在RINTDF程序中，与胰腺α-淀粉酶/淀粉葡萄糖苷酶（PAA/AMG）孵育的时间设定为4小时，并优化PAA和AMG的浓度，以确保一组纯淀粉和含淀粉食品样本的RS值与回肠造口术数据相匹配。最终，这两种酶的浓度都达到饱和，这与Englyst等人1在其可消化淀粉方法中描述的工作一致。主要区别在于，在RINTDF程序中，使用了高度纯化的即用型酶。
文献表明，食物在人体小肠中的平均停留时间为4±1小时。因此，这被选为RINTDF程序中PAA/AMG的孵育时间。在Englyst等人1的可消化碳水化合物程序中，在20分钟时取出样品以测定快速消化淀粉（RDS），在120分钟时取出缓慢消化淀粉（SDS），剩余的淀粉被定义为抗性淀粉（RS）。由于食物在小肠中的停留时间约为4小时，因此RS应定义为在这段时间内孵化后剩余的淀粉。我们现在引入一个新术语“总可消化淀粉（TDS）”来表示在4小时培养过程中水解的淀粉。因此，在当前的测定方案中，在4小时时从培养混合物中取出额外的样品以测量TDS。
抗性淀粉是样品与PAA/AMG孵育4小时后剩余的淀粉。在目前的方法中，描述了RDS、SDS、TDS和RS的测量程序。这种方法适用于所有样品。
原理：
根据用于在37°C下连续搅拌测量膳食纤维的程序（K-RINTDF；AOAC方法2017.16/2022.01），将纯淀粉或含淀粉样品与胰腺α-淀粉酶和淀粉葡萄糖苷酶（PAA/AMG）的混合物在pH 6.0的马来酸盐缓冲液中温育4小时。在20分钟（测量RDS）、120分钟（测量SDS；SDS=120分钟的淀粉值-20分钟的淀粉价值）和240分钟（测量TDS和RS）时去除反应溶液的等分试样。对于RDS、SDS和TDS，在搅拌悬浮液的同时取出1.0 mL等分试样，并将其转移到20 mL 50 mM乙酸中（以终止反应）。将这些溶液充分混合，将0.1 mL等分试样与0.1 mL AMG（100 U/mL）一起孵育，以将剩余的微量麦芽糖水解为葡萄糖，用GOPOD试剂测量。为了测量抗性淀粉（RS），在240分钟（4小时）后从搅拌溶液中取出4毫升等分试样，加入等体积的IMS中并充分混合。将样品离心，用乙醇水溶液洗涤颗粒以去除游离葡萄糖，然后悬浮在氢氧化钠中以溶解RS。溶液被中和，淀粉用AMG水解为葡萄糖，用GOPOD试剂测量葡萄糖（见图1）。
用0.5 ml乙醇湿润样品（0.5 g），在含有2 mM CaCl的20 ml马来酸钠缓冲液（50 mM，pH 6.0）中于37°C下与2 KU PAA和0.85 KU AMG一起孵育，并以170 rpm搅拌。
以不同的时间间隔取出等分试样（1.0 mL），加入20.0 mL 50 mM乙酸以终止反应（稀释21倍）。
20分钟RDS时1.0毫升
120分钟时1.0 mL-$DS（SDS=120分钟时的值，20分钟时的数值）
240分钟TDS（和可用碳水化合物）为1.0 mL
240分钟时4.0 mL+4.0 mL耐乙醇淀粉
取出等分试样（0.1 mL，一式两份）与AMG一起孵育，并使用GOPOD试剂分析葡萄糖。
图1. 根据方法1测量淀粉和食品样品中RDS、SDS、TDS和RS的程序。
适用性和准确性：
该方法适用于含有>2%w/w可消化淀粉（DS）或抗性淀粉（RS）的样品。使用这些样品，通常可以达到±5%的标准误差。DS或RS含量<2%w/w的样品误差更大。
套件：
可提供适用于进行160次测定的试剂盒（RDS、SDS、TDS和RS各40次或各种其他组合）。试剂盒包含完整的检测方法以及：
瓶1：纯化PAA（40KU/g）和AMG（17KU/g）的混合物；5.2克。
密封储存，在-10°C下干燥。有效期见单独标签。
注意：有关本产品的适当处理，请参阅SDS。
瓶2：pH 4.5和40°C下的淀粉糖苷酶[8 mL，3300 U/mL在可溶性淀粉上（或200 U/mL在对硝基苯β-麦芽糖苷上）]。
在4°C下储存。有效期见单独标签。
瓶3: GOPOD试剂缓冲液（50 mL，pH 7.4）。对羟基苯甲酸和叠氮化钠（0.09%w/v）。
在4°C下储存。有效期见单独标签。
瓶4: GOPOD试剂酶。葡萄糖氧化酶加过氧化物酶和4-氨基安替比林。冻干粉。
储存温度低于-10°C。有效期见单独标签。
瓶5: 在0.2%（w/v）苯甲酸中的D-葡萄糖标准溶液（5 mL，1.0 mg/mL）。
在室温下密封储存。有效期见单独标签。
瓶6：可消化/抗性淀粉对照（约10克）。标签上显示的可消化淀粉和抗性淀粉含量。
A.试剂溶液的制备
1.PAA/AMG储备溶液。--PAA（4KU/5mL）加AMG（1.7KU/5 mL）。在使用前，将0.5 g PAA/AMG粉末混合物（瓶1）加入25 mL缓冲液[B（a）]（马来酸钠缓冲液50 mM，pH 6.0加2 mM CaCl2，制备方法见第4页）中，在磁力搅拌器上搅拌5分钟。使用时在冰上储存。制备后4小时内使用。这是解决方案1（PAA/AMG库存解决方案）。
注意：硫酸铵悬浮液的制备方法如下：在通风橱的磁力搅拌器上，在100毫升烧杯中，将2.5克瓶子1（PAA 40 KU/g加AMG 17 KU/g）逐渐加入35毫升冷蒸馏水中，搅拌至酶完全溶解（约5分钟）。加入17克颗粒状硫酸铵，搅拌溶解。用硫酸铵溶液[B（f）]将体积调节至50毫升（制备方法见第5页）。在4°C下稳定≥3个月。
2a. AMG.使用随附的瓶子2（淀粉葡萄糖苷酶）中的内容物。
2b. 稀释AMG。将1 mL瓶2的内容物加入30 mL缓冲液[B（e）]（100 mM醋酸钠缓冲液pH 4.5，制备方法见第5页）。混合均匀，在13毫米聚丙烯管[C（t）]中分成约10毫升的等分试样，在使用之间储存在-10°C以下。这是溶液2（稀释AMG（~110 U/mL））。
3. 用蒸馏水将GOPOD试剂缓冲瓶中的内容物稀释至1升。这是解决方案3。立即使用。
5.使用提供的瓶子5中的内容物。
6.使用随附的瓶子6中的内容物。
B.试剂（未提供）：
a. 马来酸钠缓冲液50 mM，pH 6.0加2 mM CaCl2。--将11.6 g马来酸溶解在1600 mL去离子水中，用4 M（160 g/L）NaOH溶液将pH调节至6.0。加入0.6 g二水合氯化钙（CaCl2·2H2O），溶解并调节体积至2 L。在4°C下储存在密封良好的Duran®瓶中。这是缓冲区[B（a）]。
b. 乙酸溶液，50 mM。--向1 L容量瓶中加入2.9 mL冰醋酸（SigmaW200611-1KG-K；1.05 g/mL）。用去离子水稀释至1 L，并储存在4°C的Duran瓶中。
c. 氢氧化钠溶液，1.7 M。——将68 g氢氧化钠加入通风橱中的800 mL蒸馏水中，搅拌溶解。用蒸馏水将体积调节至1 L，并储存在4°c的Duran®瓶中。
d. 醋酸钠缓冲液，1.0 M，pH 3.8加氯化钙（5 mM）将57.0 mL冰醋酸（1.05 g/mL）加入800 mL蒸馏水中，用4 M氢氧化钠调节pH至3.8。加入0.74克二水合氯化钙并溶解。用蒸馏水将体积调节至1 L，并储存在4°C的Duran®瓶中。这是缓冲区[B（d）]。
e. 100 mM pH 4.5的醋酸钠缓冲液。将5.7 mL冰醋酸（1.05 g/mL）加入800 mL蒸馏水中，用1 M氢氧化钠调节pH至4.5。用蒸馏水将体积调节至1 L，并储存在4°C的Duran®瓶中。这是缓冲区[B（e）]。
f. 50%w/v.硫酸铵溶液——将50克硫酸铵加入80毫升蒸馏水中，搅拌溶解。用蒸馏水将体积调节至100毫升。储存在4°C的杜兰瓶中。
g. 50%v/v乙醇水溶液和50%v/v IMS水溶液——向500 mL蒸馏水中加入500 mL乙醇（95%v/v）或工业甲基化酒精（IMS，95%v/v）。室温下储存在1L杜兰瓶中。
C. 所需设备：
a. 研磨机。--离心式，带12齿转子和0.5毫米筛网，或类似装置。或者，旋风研磨机可用于小型测试实验室样品，前提是研磨机有足够的空气流量或其他冷却方式，以避免样品过热。
b. 绞肉机 --手动或电动，配备4.5毫米屏幕。
c. 水浴。--容纳2毫克Mixdrive 15®潜水磁力搅拌器，带浸没式加热器（如Lauda Alpha®）。（图2所示的设置是最佳的）。
d. 潜水磁力搅拌器。--2mag Mixdrive 15®潜水磁力搅拌器。
e. 分光光度计--其能够在510nm下操作、优选地装配有流通电池（10mm路径长度）。
f. 分析天平。--0.1mg可读性、准确性和精密度。
g. 台式离心机--能够容纳101 x 16.5 mm的聚丙烯管，额定转速约为3250 rcf（~4000 rpm），例如Sigma实验室离心机4-15，编号10730。
h. 冷冻干燥机--Virtis Genesis®25XL或类似产品。英国温彻斯特生物制药厂生物制药工艺系统。
I. 微型离心机--转速可达13000转/分。
j. 一次性2.0 mL聚丙烯微量离心管例如Cat: Sarstedt。地址：72.691 Sarstedt有限公司，Drinagh，Ireland。
k. pH计。--例如 Seven Easy pH Mettler Toledo.。
l. 涡流混合器。--例如Daihan Scientific VM10。
m. 水分分析仪。--例如OHAUS MB45。
n. 磁力搅拌器。--例如IKA KMO 2基本搅拌器
o. 磁力搅拌棒。--例如，Fisherbrand™PTFE搅拌棒12 x 6 mm有脊，20 x 6 mm带脊，30 x 6 mm带有脊，15 x 5 mm无脊。
p. 消化瓶250 mL Fisherbrand®苏打玻璃广口瓶，带聚乙烯内衬盖（目录号FB73219）
q. 实验室计时器。
r. 微型移液器例如Gilson Pipetman®（100µL）。 Woodside Industrial Estate, Dunstable, United Kingdom。
s. 正排量移液器例如，品牌HandyStep®S-含25 mL品牌PD Tip®（用于分配2.5或5 mL等分溶液1（PAA/AMG制剂）、4 mL等分IMS或50%IMS）和10 mL 50 mM乙酸使用5.0 mL Brand PD Tip®（分配0.1 mL溶液2和1.0 mL样品溶液）。
t. 聚丙烯管Sarstedt聚丙烯管；40毫升、84 x 30毫米（目录号62.555）和Sarstedt聚丙烯管；13mL，101 x 16.5毫米（目录号60.541.685）。
u. 玻璃试管--16 x 100毫米，容量14毫升
v. 塑料“午餐盒”--大到足以容纳试管架并用作冰水浴。
w. 可选：带精密切割孔的聚丙烯板。--将40mL聚丙烯管固定并对齐在2mag Mixdrive 15®潜水磁力搅拌器的搅拌板上（图2）。
D.试样制备：
收集和准备要吃的样品，即应准备和烘烤烘焙混合物，煮意大利面等。如果脂肪含量>10%，则根据AOAC 985.29进行脱脂。对于高水分样品（>25%），最好冷冻干燥。在研磨机[B（a）]中研磨约50克，使其通过0.5毫米的筛子。将所有材料转移到广口塑料罐中，密封，通过摇晃和倒置充分混合。在有干燥剂的情况下储存。在绞肉机中研磨湿样品（如湿意大利面），得到均匀的糊状物。取出代表性样品进行分析并记录重量。另外，确定湿样品的含水量，并在计算中考虑液体体积。
E. 样品的酶消化
方法1. 分析约0.5克样品的程序。
（a） 精确称取约0.5 g样品，精确到小数点后三位，放入30 x 84 mm（40 mL）聚丙烯管[C（t）]中。记录重量。向每个试管中加入20 x 6 mm搅拌棒[C（o）]。
（b） 添加缓冲液。--用0.5 mL 95%v/v乙醇（或IMS）湿润样品，并向每个试管中加入17.5 mL缓冲液[B（a）]（马来酸钠缓冲液50 mM，pH 6.0加2 mM CaCl2）。盖上试管盖，将其放在水浴中的2mg Mixdrive 15®潜水磁力搅拌器[C（d）]上，让内容物在170rpm的搅拌下平衡至37°C 5分钟（见图3）。
（c） 用PAA/AMG溶液孵育--加入2.5 mL溶液1（PAA/AMG溶液[A（1）]），盖上试管盖，在2mag Mixdrive 15®潜水磁力搅拌器上以37°C和170 rpm的速度孵育反应溶液。
注意：如果使用[A（1）]中制备的该酶的（NH4）2SO4悬浮液，请加入1 mL酶悬浮液和1.5 mL缓冲液[B（A）]（马来酸钠缓冲液50 mM，pH 6.0加2 mM CaCl2）。
方法2. 分析约1.0 g样品的程序（使用AOAC方法2017.16）。
（a） 精确称取约1.0 g样品，精确到小数点后三位，放入250 mL Fisherbrand玻璃®瓶中[C（p）]。记录重量。向每个瓶子中加入一个30 x 6 mm的搅拌棒[C（o）]。
（b） 添加缓冲液。--用1.0 mL 95%v/v乙醇（或IMS）湿润样品，并向每个瓶中加入35 mL缓冲液[B（a）]（马来酸钠缓冲液50 mM，pH 6.0加2 mM CaCl2）。盖上瓶盖，将瓶子放在水浴[C（C）]中的2mg Mixdrive 15®潜水磁力搅拌器[C（d）]上，让内容物在170rpm的搅拌下平衡至37°C 5分钟（见图3）。
（c） 用PAA/AMG溶液孵育--加入5 mL溶液1（PAA/AMG溶液[A（1）]），盖上瓶盖，在2mag Mixdrive 15®潜水磁力搅拌器上以37°C和170 rpm的速度孵育反应溶液。
注意：如果使用[A（1）]中制备的该酶的(NH4)2SO4悬浮液，请加入2 mL酶悬浮液和3 mL缓冲液[B（A）]（马来酸钠缓冲液50 mM，pH 6.0加2 mM CaCl2）。
（b） 将每种溶液2mL转移到2.0mL聚丙烯微量离心管[C（j）]中，以13000rpm离心5分钟。
（c） 将两份等分试样（0.1 mL）转移到16 x 100 mm玻璃试管[c（u）]的底部，加入0.1 mL溶液2（稀释AMG（110 u/mL），[A（2b）]），混合均匀，在50°c下孵育30分钟。然后加入3.0 mL GOPOD试剂[A（4）]，在50℃下孵育20分钟。测量样品和葡萄糖标准品（如下制备）在510 nm下相对于试剂空白的吸光度。
通过将0.2 mL缓冲液[B（e）]（乙酸钠缓冲液，100 mM，pH 4.5）与3.0 mL GOPOD试剂混合来制备试剂空白溶液，并通过将0.1 mL瓶5（D-葡萄糖，1 mg/mL）[A（5）]加上0.1 mL缓冲液[P（e）][乙酸钠缓冲液（100 mM，pH4.5）与3.0mL GOPOD试剂[A（4）]混合来制得D-葡萄糖标准品（一式四份）。将这些溶液与样品溶液在50°C下孵育20分钟。
（d） 按照第H节所述或使用适当的MegaCalc™Excel®计算器计算RDS、SDS和TDS含量。
G. 抗性淀粉的测定：
（a） 240分钟（4小时）后，在搅拌培养溶液（样品加PAA/AMG）的同时，用正排量分配器[C（s）]取出4.0 mL悬浮液，并将其转移到含有4.0 mL 95%v/v乙醇或IMS的101 x 16.5 mm聚丙烯管[C（t）]中。盖上试管盖，反复倒置试管，将内容物彻底混合。
（b） 在台式离心机[C（g）]中以4000 rpm的速度离心试管10分钟，并在离心机停止后立即小心倾析上清液。通过在涡流混合器上搅拌，将颗粒重新悬浮在2 mL 50%v/v乙醇水溶液[B（g）]中。然后向试管中再加入6mL 50%v/v乙醇水溶液。盖上试管盖，在涡流混合器上混合内容物。离心试管并回收颗粒。通过将管子倒置在吸水纸上，确保去除所有游离液体。再次，将颗粒重新悬浮在50%v/v乙醇水溶液（2+6 mL）中，以4000 rpm离心10分钟。倾析上清液，去除游离液体，用Parafilm®覆盖试管，直至进行RS测定。
（c） 向每个试管中加入磁力搅拌棒（5 x 15 mm）[c（o）]和2 mL冷1.7 M NaOH[B（c）]。通过在磁力搅拌器上的冰/水浴中搅拌管内容物约20分钟，重新悬浮颗粒（并溶解RS）（图4）。
（d） 在磁力搅拌器上搅拌的同时，向每个试管中加入8 mL缓冲液[B（d）]（1.0 M醋酸钠缓冲液，pH 3.8）。立即加入0.1 mL瓶2（AMG 3300 U/mL）[A（2a）]，充分混合内容物，将试管放入50°C的水浴中，在涡流混合器上间歇混合培养30分钟。
（f） 对于RS含量>10%的样品，将试管中的内容物定量转移到100 mL容量瓶中（使用水洗瓶）。使用外部磁铁将搅拌棒固定在管中，同时用水洗瓶清洗管中的溶液。用蒸馏水将体积调节至100毫升，并充分混合。在微量离心机中以13000 rpm的速度将溶液等分（2 mL）离心5分钟。
（g） 对于RS含量<10%的样品；以13000rpm离心等分（2mL）溶液5分钟（无稀释）。对于此类样品，试管中的最终体积约为10.3 mL（但是，如果分析湿样品，该体积会有所不同，计算中应适当考虑体积）。
（h） 将离心稀释的[G（e）]或未稀释的[G（f）]上清液的0.1 mL等分试样（一式两份）转移到玻璃试管（16 x 100 mm）中，加入0.1 mL缓冲液[B（e））（100 mm醋酸钠缓冲液，pH 4.5）和3.0 mL GOPOD试剂。在50°C下孵育20分钟。在510 nm处测量样品和葡萄糖标准品（如下制备）相对于试剂空白的吸光度。
通过将0.2 mL缓冲液[B（e）]（乙酸钠缓冲液，100 mM，pH 4.5）与3.0 mL GOPOD试剂混合来制备试剂空白溶液，并通过将0.1 mL瓶5（D-葡萄糖，1 mg/mL）[A（5）]加上0.1 mL缓冲液[P（e）][乙酸钠缓冲液（100 mM，pH4.5）与3.0mL GOPOD试剂[A（4）]混合来制得D-葡萄糖标准品（一式四份）。将这些溶液与样品溶液在50°C下孵育20分钟。
（i） 按照[H（b）]节所述或使用适当的MegaCalc™Excel®计算器计算RS含量。
H.计算（可消化淀粉和抗性淀粉）
注意：使用Mega Calc™可以简化这些计算，该产品可从Megazyme网（www.Megazyme.com）上的产品下载。
（a） 计算测试样品中的可消化淀粉（RDS、SDS和TDS）（%w/w，“原样”基础），如下所示：
方法1和2。
可消化淀粉（RDS、SDS或TDS）（g/100 g样品）：
=ΔA x F x EV/W x D/0.1 x 100 x 1/1000000 x 162/180
=ΔA x F x EV/W x 0.0189
其中：
ΔA =根据反应空白读取RDS（ΔARDS）吸光度反应20分钟。根据反应空白读取SDS（ΔASDS）吸光度反应120分钟后减去ΔARDS。TDS（ΔATDS）吸光度反应读数240分钟后反应空白。
F =从吸光度到µg的转换（测定GOPOD反应中100µg D-葡萄糖的吸光度）[F=100（µg D-葡糖）除以100µg D-葡萄糖的GOPOD吸光度]。
EV =提取体积（mL）（方法1=20.5；方法2=41）。
W =分析样品的“原样”重量，单位为克；即约0.50克（方法1）或约1.0克（方法2）（精确称重）。
D =样品稀释度（21；将1.0 mL样品加入20 mL稀释的乙酸中酸）。
0.1 =分析的样品体积。
100 =换算为g/100g。
1000000 =从µg到g的转换。
162/180 =从测定的游离D-葡萄糖转化为无水D-葡萄糖的因子正如淀粉中所发生的那样。
（b） 按如下方式计算测试样品中的抗性淀粉（RS）（%w/w，按“原样”计算）：
抗性淀粉（g/100g样品）：
=ΔA x F x EV/4 x FV/0.1 x 1/1000000 x 100/W x 162/180
=ΔA x F x EV/W x FV x 0.000225
其中：
ΔA =相对于试剂空白读取的吸光度（反应）。
F =从吸光度到µg的转换（确定GOPOD反应中100µg D-葡萄糖的吸光度[F=100（µg D-葡糖）除以这100µg D-葡糖的GOPOD吸光度]。
EV =提取体积（mL）（方法1=20.5；方法2=41）。
4 =从反应混合物中提取的用于RS分析的溶液体积。
FV/0.1 =0.1 mL等分试样，取自最终体积（FV；100 mL或10.3 mL），用于使用GOPOD试剂测定葡萄糖。
1000000 =从µg到g的转换。
100/W =换算为g/100g。
W =分析样品的“原样”重量，单位为克；即0.50克或~1.0克（精确称重）。
162/180 =从游离D-葡萄糖转化为淀粉中无水D-葡萄糖的因子。
附录：
图2.孵化方法1。样品（约0.5 g）装在40 mL、30 x 84 mm聚丙烯管中，置于水浴中2mg Mixdrive 15®潜水磁力搅拌器中。这种布置允许在受控速度（170 rpm）和37°C下搅拌15个样品。
图3.孵化方法2。样品（约1.0 g）装在Fisherbrand瓶中，置于水浴中2mg Mixdrive 15®潜水磁力搅拌器上。这种布置允许在受控速度（170 rpm）和37°C下搅拌15个样品。
图4.在磁力搅拌器上布置冰水浴，用于将抗性淀粉溶解在1.7 M NaOH中。
图5.在淀粉葡萄糖苷酶（0.25或0.5 KU/测定）存在下，用胰α-淀粉酶（2.0 KU）水解1 g小麦淀粉（WS）或Fibersym™（FS；磷酸盐交联淀粉；RS4）。在不同时间间隔取出样品，稀释，终止反应，测量D-葡萄糖并计算可消化淀粉。
表1.使用DSTRS测定程序在四天内对样品进行两次快速消化淀粉测量的重复性（%RSDr）。
a所有结果均按“原样”以淀粉形式呈现
b每天对每种材料的样品进行两次分析。
c SD=标准偏差；RSDr%=重复性标准偏差。
表2.使用DSTRS测定程序在四天内对七个研磨样品进行两次缓慢消化淀粉测量的重复性（%RSDr）分析。
a所有结果均按“原样”以淀粉形式呈现。
b每天对每种材料的样品进行两次分析。
c SD=标准偏差；RSDr%=重复性标准偏差。
测试样品的缓慢消化淀粉含量在1.0至49.2%（w/w）的工作范围内。该样品数据集的重复性（%RSDr）非常好，对于含有>1%SDS的样品，重复性小于或等于11.63%（注：All Bran®的非常高的值是由于该组分的绝对淀粉值非常低）。
表3.使用DSTRS测定程序在四个单独的日子里对七个研磨样品进行两次总可消化淀粉测量的重复性（%RSDr）。
a所有结果均按“原样”以淀粉形式呈现
b每天对每种材料的样品进行两次分析。
c SD=标准偏差
RSDr %=重复性标准偏差。
表4.使用DSTRS测定程序在四天内对七个研磨样品进行两次抗性淀粉测量的重复性（%RSDr）分析。
a所有结果均按“原样”以淀粉形式呈现。
b每天对每种材料的样品进行两次分析。
c SD=标准偏差；RSDr%=重复性标准偏差。
测试样品的抗性淀粉含量在0.3至51.8%（w/w）的工作范围内。该样本数据集的重复性（%RSDr）非常好，所有样本的重复性均小于或等于6.33%。
2. Wahlquist, M. I., Wilmshurst, E. G., Murton, C. R. & Richardson, E. N. (1978).链长对葡萄糖吸收和相关代谢组反应的影响。 Am. J. Clin. Nutr., 31, 1998-2001.
3. Jenkins, D. J. A., Mayer, A., Jenkins, A. L., Wolever, T. M. S., Collier, G. R., Wesson, V. & Cuff, D. (1978).简单和复杂碳水化合物：葡萄糖和葡萄糖聚合物之间缺乏血糖差异。 J. Clin. Nutr. Gastroenterol., 2, 113-116.
4. Englyst, H., Wiggins, H. L. & Cummins, J. H. (1982). 通过糖组分的气液色谱法测定植物性食品中的非淀粉多糖，如糖醇乙酸酯。Analyst, 107, 307-318.
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简介：
专业用语，快速消化淀粉（RDS）、缓慢消化淀粉（SDS）和 Englyst1等人于1992年引入了抗淀粉酶淀粉（RS），以反映 体内淀粉消化率。他们的工作，以及Wahlquist2等人的工作，Jenkins等人3 其他研究表明，食物的生理形态和淀粉的性质是 淀粉消化速率的主要决定因素。在这段时间里，它 研究还表明，“可消化”淀粉可以同时水解和吸收 作为单糖，但有些淀粉在人体内难以消化 肠。Englyst等人。4 在他们的研究中首次观察到抗淀粉酶淀粉（RS）开发了一种非淀粉多糖（NSP）的测量方法。这些作者认为NSP是膳食纤维（DF）的最佳测量方法，因此所有淀粉都是在NSP的测量中溶解（使用DMSO）并水解去除。最近，食品法典委员会5发布了膳食纤维的定义包括耐消化淀粉（RS）和是否纳入不易消化淀粉的决定低聚糖（NDO）留给各个国家。在RINTDF程序中，与胰腺α-淀粉酶/淀粉葡萄糖苷酶（PAA/AMG）孵育的时间设定为4小时，并优化PAA和AMG的浓度，以确保一组纯淀粉和含淀粉食品样本的RS值与回肠造口术数据相匹配。最终，这两种酶的浓度都达到饱和，这与Englyst等人1在其可消化淀粉方法中描述的工作一致。主要区别在于，在RINTDF程序中，使用了高度纯化的即用型酶。
文献表明，食物在人体小肠中的平均停留时间为4±1小时。因此，这被选为RINTDF程序中PAA/AMG的孵育时间。在Englyst等人1的可消化碳水化合物程序中，在20分钟时取出样品以测定快速消化淀粉（RDS），在120分钟时取出缓慢消化淀粉（SDS），剩余的淀粉被定义为抗性淀粉（RS）。由于食物在小肠中的停留时间约为4小时，因此RS应定义为在这段时间内孵化后剩余的淀粉。我们现在引入一个新术语“总可消化淀粉（TDS）”来表示在4小时培养过程中水解的淀粉。因此，在当前的测定方案中，在4小时时从培养混合物中取出额外的样品以测量TDS。
抗性淀粉是样品与PAA/AMG孵育4小时后剩余的淀粉。在目前的方法中，描述了RDS、SDS、TDS和RS的测量程序。这种方法适用于所有样品。
原理：
根据用于在37°C下连续搅拌测量膳食纤维的程序（K-RINTDF；AOAC方法2017.16/2022.01），将纯淀粉或含淀粉样品与胰腺α-淀粉酶和淀粉葡萄糖苷酶（PAA/AMG）的混合物在pH 6.0的马来酸盐缓冲液中温育4小时。在20分钟（测量RDS）、120分钟（测量SDS；SDS=120分钟的淀粉值-20分钟的淀粉价值）和240分钟（测量TDS和RS）时去除反应溶液的等分试样。对于RDS、SDS和TDS，在搅拌悬浮液的同时取出1.0 mL等分试样，并将其转移到20 mL 50 mM乙酸中（以终止反应）。将这些溶液充分混合，将0.1 mL等分试样与0.1 mL AMG（100 U/mL）一起孵育，以将剩余的微量麦芽糖水解为葡萄糖，用GOPOD试剂测量。为了测量抗性淀粉（RS），在240分钟（4小时）后从搅拌溶液中取出4毫升等分试样，加入等体积的IMS中并充分混合。将样品离心，用乙醇水溶液洗涤颗粒以去除游离葡萄糖，然后悬浮在氢氧化钠中以溶解RS。溶液被中和，淀粉用AMG水解为葡萄糖，用GOPOD试剂测量葡萄糖（见图1）。
用0.5 ml乙醇湿润样品（0.5 g），在含有2 mM CaCl的20 ml马来酸钠缓冲液（50 mM，pH 6.0）中于37°C下与2 KU PAA和0.85 KU AMG一起孵育，并以170 rpm搅拌。
以不同的时间间隔取出等分试样（1.0 mL），加入20.0 mL 50 mM乙酸以终止反应（稀释21倍）。
20分钟RDS时1.0毫升
120分钟时1.0 mL-$DS（SDS=120分钟时的值，20分钟时的数值）
240分钟TDS（和可用碳水化合物）为1.0 mL
240分钟时4.0 mL+4.0 mL耐乙醇淀粉
取出等分试样（0.1 mL，一式两份）与AMG一起孵育，并使用GOPOD试剂分析葡萄糖。
图1. 根据方法1测量淀粉和食品样品中RDS、SDS、TDS和RS的程序。
该方法适用于含有>2%w/w可消化淀粉（DS）或抗性淀粉（RS）的样品。使用这些样品，通常可以达到±5%的标准误差。DS或RS含量<2%w/w的样品误差更大。
套件：
可提供适用于进行160次测定的试剂盒（RDS、SDS、TDS和RS各40次或各种其他组合）。试剂盒包含完整的检测方法以及：
瓶1：纯化PAA（40KU/g）和AMG（17KU/g）的混合物；5.2克。
密封储存，在-10°C下干燥。有效期见单独标签。
注意：有关本产品的适当处理，请参阅SDS。
瓶2：pH 4.5和40°C下的淀粉糖苷酶[8 mL，3300 U/mL在可溶性淀粉上（或200 U/mL在对硝基苯β-麦芽糖苷上）]。
在4°C下储存。有效期见单独标签。
瓶3: GOPOD试剂缓冲液（50 mL，pH 7.4）。对羟基苯甲酸和叠氮化钠（0.09%w/v）。
在4°C下储存。有效期见单独标签。
瓶4: GOPOD试剂酶。葡萄糖氧化酶加过氧化物酶和4-氨基安替比林。冻干粉。
储存温度低于-10°C。有效期见单独标签。
瓶5: 在0.2%（w/v）苯甲酸中的D-葡萄糖标准溶液（5 mL，1.0 mg/mL）。
在室温下密封储存。有效期见单独标签。
瓶6：可消化/抗性淀粉对照（约10克）。标签上显示的可消化淀粉和抗性淀粉含量。
A.试剂溶液的制备
1.PAA/AMG储备溶液。--PAA（4KU/5mL）加AMG（1.7KU/5 mL）。在使用前，将0.5 g PAA/AMG粉末混合物（瓶1）加入25 mL缓冲液[B（a）]（马来酸钠缓冲液50 mM，pH 6.0加2 mM CaCl2，制备方法见第4页）中，在磁力搅拌器上搅拌5分钟。使用时在冰上储存。制备后4小时内使用。这是解决方案1（PAA/AMG库存解决方案）。
注意：硫酸铵悬浮液的制备方法如下：在通风橱的磁力搅拌器上，在100毫升烧杯中，将2.5克瓶子1（PAA 40 KU/g加AMG 17 KU/g）逐渐加入35毫升冷蒸馏水中，搅拌至酶完全溶解（约5分钟）。加入17克颗粒状硫酸铵，搅拌溶解。用硫酸铵溶液[B（f）]将体积调节至50毫升（制备方法见第5页）。在4°C下稳定≥3个月。
2a. AMG.使用随附的瓶子2（淀粉葡萄糖苷酶）中的内容物。
2b. 稀释AMG。将1 mL瓶2的内容物加入30 mL缓冲液[B（e）]（100 mM醋酸钠缓冲液pH 4.5，制备方法见第5页）。混合均匀，在13毫米聚丙烯管[C（t）]中分成约10毫升的等分试样，在使用之间储存在-10°C以下。这是溶液2（稀释AMG（~110 U/mL））。
3. 用蒸馏水将GOPOD试剂缓冲瓶中的内容物稀释至1升。这是解决方案3。立即使用。
- 将GOPOD试剂酶瓶的内容物溶解在20mL溶液3中，并将其定量转移到装有溶液3剩余部分的瓶中。用铝箔盖住这个瓶子，以保护封闭的试剂不受光线照射。这是葡萄糖测定试剂（GOPOD试剂）。在4°C下稳定≥1个月，或在-10°C以下稳定≥12个月。如果该试剂要冷冻储存，应将其分成约250毫升的等分试样，并储存在聚丙烯容器中。不要将这些储存的溶液应用于多个冻融循环。
5.使用提供的瓶子5中的内容物。
6.使用随附的瓶子6中的内容物。
B.试剂（未提供）：
a. 马来酸钠缓冲液50 mM，pH 6.0加2 mM CaCl2。--将11.6 g马来酸溶解在1600 mL去离子水中，用4 M（160 g/L）NaOH溶液将pH调节至6.0。加入0.6 g二水合氯化钙（CaCl2·2H2O），溶解并调节体积至2 L。在4°C下储存在密封良好的Duran®瓶中。这是缓冲区[B（a）]。
b. 乙酸溶液，50 mM。--向1 L容量瓶中加入2.9 mL冰醋酸（SigmaW200611-1KG-K；1.05 g/mL）。用去离子水稀释至1 L，并储存在4°C的Duran瓶中。
c. 氢氧化钠溶液，1.7 M。——将68 g氢氧化钠加入通风橱中的800 mL蒸馏水中，搅拌溶解。用蒸馏水将体积调节至1 L，并储存在4°c的Duran®瓶中。
d. 醋酸钠缓冲液，1.0 M，pH 3.8加氯化钙（5 mM）将57.0 mL冰醋酸（1.05 g/mL）加入800 mL蒸馏水中，用4 M氢氧化钠调节pH至3.8。加入0.74克二水合氯化钙并溶解。用蒸馏水将体积调节至1 L，并储存在4°C的Duran®瓶中。这是缓冲区[B（d）]。
e. 100 mM pH 4.5的醋酸钠缓冲液。将5.7 mL冰醋酸（1.05 g/mL）加入800 mL蒸馏水中，用1 M氢氧化钠调节pH至4.5。用蒸馏水将体积调节至1 L，并储存在4°C的Duran®瓶中。这是缓冲区[B（e）]。
f. 50%w/v.硫酸铵溶液——将50克硫酸铵加入80毫升蒸馏水中，搅拌溶解。用蒸馏水将体积调节至100毫升。储存在4°C的杜兰瓶中。
g. 50%v/v乙醇水溶液和50%v/v IMS水溶液——向500 mL蒸馏水中加入500 mL乙醇（95%v/v）或工业甲基化酒精（IMS，95%v/v）。室温下储存在1L杜兰瓶中。
C. 所需设备：
a. 研磨机。--离心式，带12齿转子和0.5毫米筛网，或类似装置。或者，旋风研磨机可用于小型测试实验室样品，前提是研磨机有足够的空气流量或其他冷却方式，以避免样品过热。
b. 绞肉机 --手动或电动，配备4.5毫米屏幕。
c. 水浴。--容纳2毫克Mixdrive 15®潜水磁力搅拌器，带浸没式加热器（如Lauda Alpha®）。（图2所示的设置是最佳的）。
d. 潜水磁力搅拌器。--2mag Mixdrive 15®潜水磁力搅拌器。
e. 分光光度计--其能够在510nm下操作、优选地装配有流通电池（10mm路径长度）。
f. 分析天平。--0.1mg可读性、准确性和精密度。
g. 台式离心机--能够容纳101 x 16.5 mm的聚丙烯管，额定转速约为3250 rcf（~4000 rpm），例如Sigma实验室离心机4-15，编号10730。
h. 冷冻干燥机--Virtis Genesis®25XL或类似产品。英国温彻斯特生物制药厂生物制药工艺系统。
I. 微型离心机--转速可达13000转/分。
j. 一次性2.0 mL聚丙烯微量离心管例如Cat: Sarstedt。地址：72.691 Sarstedt有限公司，Drinagh，Ireland。
k. pH计。--例如 Seven Easy pH Mettler Toledo.。
l. 涡流混合器。--例如Daihan Scientific VM10。
m. 水分分析仪。--例如OHAUS MB45。
n. 磁力搅拌器。--例如IKA KMO 2基本搅拌器
o. 磁力搅拌棒。--例如，Fisherbrand™PTFE搅拌棒12 x 6 mm有脊，20 x 6 mm带脊，30 x 6 mm带有脊，15 x 5 mm无脊。
p. 消化瓶250 mL Fisherbrand®苏打玻璃广口瓶，带聚乙烯内衬盖（目录号FB73219）
q. 实验室计时器。
r. 微型移液器例如Gilson Pipetman®（100µL）。 Woodside Industrial Estate, Dunstable, United Kingdom。
s. 正排量移液器例如，品牌HandyStep®S-含25 mL品牌PD Tip®（用于分配2.5或5 mL等分溶液1（PAA/AMG制剂）、4 mL等分IMS或50%IMS）和10 mL 50 mM乙酸使用5.0 mL Brand PD Tip®（分配0.1 mL溶液2和1.0 mL样品溶液）。
t. 聚丙烯管Sarstedt聚丙烯管；40毫升、84 x 30毫米（目录号62.555）和Sarstedt聚丙烯管；13mL，101 x 16.5毫米（目录号60.541.685）。
u. 玻璃试管--16 x 100毫米，容量14毫升
v. 塑料“午餐盒”--大到足以容纳试管架并用作冰水浴。
w. 可选：带精密切割孔的聚丙烯板。--将40mL聚丙烯管固定并对齐在2mag Mixdrive 15®潜水磁力搅拌器的搅拌板上（图2）。
D.试样制备：
收集和准备要吃的样品，即应准备和烘烤烘焙混合物，煮意大利面等。如果脂肪含量>10%，则根据AOAC 985.29进行脱脂。对于高水分样品（>25%），最好冷冻干燥。在研磨机[B（a）]中研磨约50克，使其通过0.5毫米的筛子。将所有材料转移到广口塑料罐中，密封，通过摇晃和倒置充分混合。在有干燥剂的情况下储存。在绞肉机中研磨湿样品（如湿意大利面），得到均匀的糊状物。取出代表性样品进行分析并记录重量。另外，确定湿样品的含水量，并在计算中考虑液体体积。
E. 样品的酶消化
方法1. 分析约0.5克样品的程序。
（a） 精确称取约0.5 g样品，精确到小数点后三位，放入30 x 84 mm（40 mL）聚丙烯管[C（t）]中。记录重量。向每个试管中加入20 x 6 mm搅拌棒[C（o）]。
（b） 添加缓冲液。--用0.5 mL 95%v/v乙醇（或IMS）湿润样品，并向每个试管中加入17.5 mL缓冲液[B（a）]（马来酸钠缓冲液50 mM，pH 6.0加2 mM CaCl2）。盖上试管盖，将其放在水浴中的2mg Mixdrive 15®潜水磁力搅拌器[C（d）]上，让内容物在170rpm的搅拌下平衡至37°C 5分钟（见图3）。
（c） 用PAA/AMG溶液孵育--加入2.5 mL溶液1（PAA/AMG溶液[A（1）]），盖上试管盖，在2mag Mixdrive 15®潜水磁力搅拌器上以37°C和170 rpm的速度孵育反应溶液。
注意：如果使用[A（1）]中制备的该酶的（NH4）2SO4悬浮液，请加入1 mL酶悬浮液和1.5 mL缓冲液[B（A）]（马来酸钠缓冲液50 mM，pH 6.0加2 mM CaCl2）。
方法2. 分析约1.0 g样品的程序（使用AOAC方法2017.16）。
（a） 精确称取约1.0 g样品，精确到小数点后三位，放入250 mL Fisherbrand玻璃®瓶中[C（p）]。记录重量。向每个瓶子中加入一个30 x 6 mm的搅拌棒[C（o）]。
（b） 添加缓冲液。--用1.0 mL 95%v/v乙醇（或IMS）湿润样品，并向每个瓶中加入35 mL缓冲液[B（a）]（马来酸钠缓冲液50 mM，pH 6.0加2 mM CaCl2）。盖上瓶盖，将瓶子放在水浴[C（C）]中的2mg Mixdrive 15®潜水磁力搅拌器[C（d）]上，让内容物在170rpm的搅拌下平衡至37°C 5分钟（见图3）。
（c） 用PAA/AMG溶液孵育--加入5 mL溶液1（PAA/AMG溶液[A（1）]），盖上瓶盖，在2mag Mixdrive 15®潜水磁力搅拌器上以37°C和170 rpm的速度孵育反应溶液。
注意：如果使用[A（1）]中制备的该酶的(NH4)2SO4悬浮液，请加入2 mL酶悬浮液和3 mL缓冲液[B（A）]（马来酸钠缓冲液50 mM，pH 6.0加2 mM CaCl2）。
- 可消化淀粉的测定：
（b） 将每种溶液2mL转移到2.0mL聚丙烯微量离心管[C（j）]中，以13000rpm离心5分钟。
（c） 将两份等分试样（0.1 mL）转移到16 x 100 mm玻璃试管[c（u）]的底部，加入0.1 mL溶液2（稀释AMG（110 u/mL），[A（2b）]），混合均匀，在50°c下孵育30分钟。然后加入3.0 mL GOPOD试剂[A（4）]，在50℃下孵育20分钟。测量样品和葡萄糖标准品（如下制备）在510 nm下相对于试剂空白的吸光度。
通过将0.2 mL缓冲液[B（e）]（乙酸钠缓冲液，100 mM，pH 4.5）与3.0 mL GOPOD试剂混合来制备试剂空白溶液，并通过将0.1 mL瓶5（D-葡萄糖，1 mg/mL）[A（5）]加上0.1 mL缓冲液[P（e）][乙酸钠缓冲液（100 mM，pH4.5）与3.0mL GOPOD试剂[A（4）]混合来制得D-葡萄糖标准品（一式四份）。将这些溶液与样品溶液在50°C下孵育20分钟。
（d） 按照第H节所述或使用适当的MegaCalc™Excel®计算器计算RDS、SDS和TDS含量。
G. 抗性淀粉的测定：
（a） 240分钟（4小时）后，在搅拌培养溶液（样品加PAA/AMG）的同时，用正排量分配器[C（s）]取出4.0 mL悬浮液，并将其转移到含有4.0 mL 95%v/v乙醇或IMS的101 x 16.5 mm聚丙烯管[C（t）]中。盖上试管盖，反复倒置试管，将内容物彻底混合。
（b） 在台式离心机[C（g）]中以4000 rpm的速度离心试管10分钟，并在离心机停止后立即小心倾析上清液。通过在涡流混合器上搅拌，将颗粒重新悬浮在2 mL 50%v/v乙醇水溶液[B（g）]中。然后向试管中再加入6mL 50%v/v乙醇水溶液。盖上试管盖，在涡流混合器上混合内容物。离心试管并回收颗粒。通过将管子倒置在吸水纸上，确保去除所有游离液体。再次，将颗粒重新悬浮在50%v/v乙醇水溶液（2+6 mL）中，以4000 rpm离心10分钟。倾析上清液，去除游离液体，用Parafilm®覆盖试管，直至进行RS测定。
（c） 向每个试管中加入磁力搅拌棒（5 x 15 mm）[c（o）]和2 mL冷1.7 M NaOH[B（c）]。通过在磁力搅拌器上的冰/水浴中搅拌管内容物约20分钟，重新悬浮颗粒（并溶解RS）（图4）。
（d） 在磁力搅拌器上搅拌的同时，向每个试管中加入8 mL缓冲液[B（d）]（1.0 M醋酸钠缓冲液，pH 3.8）。立即加入0.1 mL瓶2（AMG 3300 U/mL）[A（2a）]，充分混合内容物，将试管放入50°C的水浴中，在涡流混合器上间歇混合培养30分钟。
（f） 对于RS含量>10%的样品，将试管中的内容物定量转移到100 mL容量瓶中（使用水洗瓶）。使用外部磁铁将搅拌棒固定在管中，同时用水洗瓶清洗管中的溶液。用蒸馏水将体积调节至100毫升，并充分混合。在微量离心机中以13000 rpm的速度将溶液等分（2 mL）离心5分钟。
（g） 对于RS含量<10%的样品；以13000rpm离心等分（2mL）溶液5分钟（无稀释）。对于此类样品，试管中的最终体积约为10.3 mL（但是，如果分析湿样品，该体积会有所不同，计算中应适当考虑体积）。
（h） 将离心稀释的[G（e）]或未稀释的[G（f）]上清液的0.1 mL等分试样（一式两份）转移到玻璃试管（16 x 100 mm）中，加入0.1 mL缓冲液[B（e））（100 mm醋酸钠缓冲液，pH 4.5）和3.0 mL GOPOD试剂。在50°C下孵育20分钟。在510 nm处测量样品和葡萄糖标准品（如下制备）相对于试剂空白的吸光度。
通过将0.2 mL缓冲液[B（e）]（乙酸钠缓冲液，100 mM，pH 4.5）与3.0 mL GOPOD试剂混合来制备试剂空白溶液，并通过将0.1 mL瓶5（D-葡萄糖，1 mg/mL）[A（5）]加上0.1 mL缓冲液[P（e）][乙酸钠缓冲液（100 mM，pH4.5）与3.0mL GOPOD试剂[A（4）]混合来制得D-葡萄糖标准品（一式四份）。将这些溶液与样品溶液在50°C下孵育20分钟。
（i） 按照[H（b）]节所述或使用适当的MegaCalc™Excel®计算器计算RS含量。
H.计算（可消化淀粉和抗性淀粉）
注意：使用Mega Calc™可以简化这些计算，该产品可从Megazyme网（www.Megazyme.com）上的产品下载。
（a） 计算测试样品中的可消化淀粉（RDS、SDS和TDS）（%w/w，“原样”基础），如下所示：
方法1和2。
可消化淀粉（RDS、SDS或TDS）（g/100 g样品）：
=ΔA x F x EV/W x D/0.1 x 100 x 1/1000000 x 162/180
=ΔA x F x EV/W x 0.0189
其中：
ΔA =根据反应空白读取RDS（ΔARDS）吸光度反应20分钟。根据反应空白读取SDS（ΔASDS）吸光度反应120分钟后减去ΔARDS。TDS（ΔATDS）吸光度反应读数240分钟后反应空白。
F =从吸光度到µg的转换（测定GOPOD反应中100µg D-葡萄糖的吸光度）[F=100（µg D-葡糖）除以100µg D-葡萄糖的GOPOD吸光度]。
EV =提取体积（mL）（方法1=20.5；方法2=41）。
W =分析样品的“原样”重量，单位为克；即约0.50克（方法1）或约1.0克（方法2）（精确称重）。
D =样品稀释度（21；将1.0 mL样品加入20 mL稀释的乙酸中酸）。
0.1 =分析的样品体积。
100 =换算为g/100g。
1000000 =从µg到g的转换。
162/180 =从测定的游离D-葡萄糖转化为无水D-葡萄糖的因子正如淀粉中所发生的那样。
（b） 按如下方式计算测试样品中的抗性淀粉（RS）（%w/w，按“原样”计算）：
抗性淀粉（g/100g样品）：
=ΔA x F x EV/4 x FV/0.1 x 1/1000000 x 100/W x 162/180
=ΔA x F x EV/W x FV x 0.000225
其中：
ΔA =相对于试剂空白读取的吸光度（反应）。
F =从吸光度到µg的转换（确定GOPOD反应中100µg D-葡萄糖的吸光度[F=100（µg D-葡糖）除以这100µg D-葡糖的GOPOD吸光度]。
EV =提取体积（mL）（方法1=20.5；方法2=41）。
4 =从反应混合物中提取的用于RS分析的溶液体积。
FV/0.1 =0.1 mL等分试样，取自最终体积（FV；100 mL或10.3 mL），用于使用GOPOD试剂测定葡萄糖。
1000000 =从µg到g的转换。
100/W =换算为g/100g。
W =分析样品的“原样”重量，单位为克；即0.50克或~1.0克（精确称重）。
162/180 =从游离D-葡萄糖转化为淀粉中无水D-葡萄糖的因子。
附录：
表1.使用DSTRS测定程序在四天内对样品进行两次快速消化淀粉测量的重复性（%RSDr）。
b每天对每种材料的样品进行两次分析。
c SD=标准偏差；RSDr%=重复性标准偏差。
表2.使用DSTRS测定程序在四天内对七个研磨样品进行两次缓慢消化淀粉测量的重复性（%RSDr）分析。
b每天对每种材料的样品进行两次分析。
c SD=标准偏差；RSDr%=重复性标准偏差。
测试样品的缓慢消化淀粉含量在1.0至49.2%（w/w）的工作范围内。该样品数据集的重复性（%RSDr）非常好，对于含有>1%SDS的样品，重复性小于或等于11.63%（注：All Bran®的非常高的值是由于该组分的绝对淀粉值非常低）。
表3.使用DSTRS测定程序在四个单独的日子里对七个研磨样品进行两次总可消化淀粉测量的重复性（%RSDr）。
b每天对每种材料的样品进行两次分析。
c SD=标准偏差
RSDr %=重复性标准偏差。
表4.使用DSTRS测定程序在四天内对七个研磨样品进行两次抗性淀粉测量的重复性（%RSDr）分析。
a所有结果均按“原样”以淀粉形式呈现。b每天对每种材料的样品进行两次分析。
c SD=标准偏差；RSDr%=重复性标准偏差。
测试样品的抗性淀粉含量在0.3至51.8%（w/w）的工作范围内。该样本数据集的重复性（%RSDr）非常好，所有样本的重复性均小于或等于6.33%。
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