霉菌和酵母菌均属于真菌界，但在形态、生理及生态特性上存在显著差异。其鉴定方法结合传统技术与现代分子生物学手段，旨在准确区分种类，尤其在医学、食品工业和环境监测中具有重要意义。
 
一、鉴定方法分类
 
1、传统形态学鉴定
 
霉菌：
 
菌落观察：菌落形态（绒毛状、棉絮状）、颜色（如青霉的蓝绿色）、边缘特征。
 
显微结构：菌丝分隔与否、孢子类型（分生孢子、孢囊孢子）及产孢结构（孢子囊、分生孢子梗）。
 
示例：曲霉的顶囊和分生孢子链，毛霉的无隔菌丝及孢囊孢子。
 
酵母菌：
 
菌落特征：光滑湿润、多为乳白色（如酿酒酵母）。
 
显微镜检：单细胞形态（椭圆形、圆形）、出芽繁殖（芽痕）、假菌丝形成（如念珠菌属）。
 
2、生理生化特性分析
 
碳/氮源利用：API 20C系统测试糖类同化（如酵母对葡萄糖 vs. 乳糖的利用）。
 
发酵试验：酵母的产气能力（杜氏管观察CO₂）。
 
温度耐受：白色念珠菌在37℃生长良好，多数环境霉菌偏好25-30℃。
 
显色培养基：CHROMagar™快速区分致病性念珠菌（如白色念珠菌显绿色）。
 
3、分子生物学技术
 
靶基因测序：
 
霉菌：ITS区域（内转录间隔区）为主，辅以β-tubulin基因。
 
酵母菌：D1/D2区（26S rDNA）或ITS测序，如隐球菌的鉴定。
 
MALDI-TOF MS：基于蛋白质谱快速鉴定至种水平，适用于临床酵母分离株。
 
全基因组测序：研究毒力基因或耐药性（如耐氟康唑的假丝酵母菌）。
 
二、鉴定流程
 
1、样本处理：无菌采集后预处理（研磨、稀释），选择性培养基抑制细菌（含氯霉素的SDA）。
 
2、分离培养：
 
霉菌：沙氏葡萄糖琼脂（SDA）或马铃薯葡萄糖琼脂（PDA），25-28℃培养3-7天。
 
酵母菌：YPD培养基或麦芽汁琼脂，30℃培养24-48小时。
 
3、初步筛选：菌落形态、颜色、气味（如红酵母的红色素）。
 
4、深入鉴定：
 
形态不明确时，采用小培养（霉菌）或玉米粉琼脂诱导酵母假菌丝。
 
生理试验（尿素酶试验区分新型隐球菌）。
 
分子确认：PCR扩增后测序比对GenBank数据库。
 
三、应用与挑战
 
1、临床诊断：快速鉴定病原真菌（如烟曲霉、白色念珠菌）指导抗真菌治疗。
 
2、工业监控：发酵过程中污染菌的检测（如鲁氏接合酵母污染果汁）。
 
3、难点：
 
双相真菌：需在不同温度下培养（如组织胞浆菌在37℃呈酵母相）。
 
近缘种区分：需多基因联合分析（如曲霉属的复合种）。
 
四、技术进展
 
1、自动化系统：VITEK 2 YST卡实现酵母快速鉴定（4-18小时）。
 
2、宏基因组学：环境样本中直接检测真菌群落，无需培养。
 
3、CRISPR检测：开发特异性探针用于即时诊断（如热带念珠菌的快速识别）。
 
五、总结
 
霉菌与酵母菌的鉴定需综合形态、生理及分子特征，传统方法为基础，分子技术提升精确度。未来趋向于高通量、自动化，以满足临床和环境监测的快速需求。