在复杂的生物系统中，细胞间的信息传递与物质交换及功能表达均依赖于一类特殊的载体——外泌体。
        外泌体作为细胞外囊泡中重要的亚群，是直径约 30-150 纳米的膜性囊泡，其内部携载着蛋白质、核酸、脂质等生物活性分子，在细胞间通讯网络中发挥关键作用（图1）。研究表明，肿瘤细胞来源的外泌体可通过促进血管生成、诱导免疫抑制微环境等途径支持肿瘤进展；神经元分泌的外泌体则参与神经信号传导调控及突触可塑性维持。这些研究的实现，均依赖于对外泌体物理特性（如粒径分布、浓度水平）的精准解析。
        而纳米颗粒跟踪分析（NTA）技术作为解析外泌体粒径与浓度等基本物理特性最为常用的技术手段之一，对外泌体相关的科研及医疗研究发挥着不可或缺的重要作用。

图1  外泌体的潜在应用

        纳米颗粒跟踪分析技术（NTA）基于光散射理论与布朗运动分析的有机结合，实现对外泌体等纳米颗粒的精准表征。其核心构成及技术原理如下（图2）：​

图2  NTA核心结构

        纳米颗粒跟踪分析技术（NTA）通过激光散射光路系统，对溶液中的纳米级颗粒进行动态监测。当单束激光聚焦于样品池时，颗粒的散射光信号被高灵敏度相机捕捉，形成实时动态图像。基于Stokes-Einstein方程（图3），通过追踪单个颗粒的运动轨迹并进行统计分析，可精确计算颗粒的流体力学直径及浓度分布。该技术实现了对 10-1000 纳米粒径范围颗粒的单颗粒分辨率检测，尤其适用于异质性外泌体群体的表征。

图3  Stokes-Einstein方程

        外泌体的精准表征是开展基础研究与临床转化的关键前提。作为纳米级囊泡检测的核心技术，纳米颗粒跟踪分析（NTA）在与其他表征手段的对比中展现出不可替代的优势。
        由于技术原理的限制，其他表征手段存在着一些缺陷：TEM技术检测流程复杂，程耗时长（ 4 小时以上），且仅能获取局部颗粒信息，人工计数误差率高（ 15%-20%），难以反映样本整体分布特征；DLS技术在多分散体系检测领域表现不佳，且易产生粒径分布偏移误差、在低丰度样本检测中误差显著增大；流式细胞术需对目标颗粒进行荧光标记以实现检测，标记过程可能改变外泌体天然属性，且仅能提供单一荧光参数分析。
        而NTA 技术凭借其在精准高效、动态检测、无标记分析及可视化验证方面的独特优势和对多分散体系检测的优良表现，显著弥补了传统外泌体表征技术的局限性。并且，由于NTA对外泌体检测没有任何预处理要求，即直接对提取的原生态外泌体样本（最接近生理条件）进行检测，使得NTA能够精准刻画外泌体的物理化学特性，为深入探索外泌体功能机制提供可靠的数据支撑。其在不同应用场景下展现出的精准性与高效性，为后续在外泌体研究各领域的深入应用奠定了坚实基础。
        基于此，NTA技术已经是外泌体研究不可或缺的一种重要分析手段，以下将通过具体应用案例，进一步展现其在实际研究与临床实践中的重要价值。

图4  案例文献1

        《Nanoparticle tracking analysis monitors microvesicle and exosome secretion from immune cells》研究中（图4），NTA 被用于监测免疫细胞（如 Jurkat T 细胞、树突状细胞）在刺激（离子载体、LPS）或抑制（基因敲低、分泌抑制剂）条件下的 EVs 分泌动态。NTA 可动态追踪 EVs 浓度变化，如离子载体刺激使 Jurkat T 细胞 EVs 浓度增加 43%-126%，LPS 激活树突状细胞后 EVs 分泌 48 小时达峰值；通过粒径分布区分微囊泡（100-1000 nm）与外泌体（30-150 nm），发现免疫细胞分泌的 EVs 以 70-90 nm 为主（图5）；结合抗 CD45 免疫磁珠去除 T 细胞来源 EVs，NTA 信号减少 60%，验证检测特异性。该技术为免疫细胞 EVs 分泌与激活状态的关联研究提供了精准的定量工具。

图5  该案例研究中，NTA测得的外泌体粒径与浓度

        该研究证明，纳米颗粒跟踪分析（NTA）技术通过单颗粒实时追踪，能对细胞 EVs实现精准的粒径与浓度表征， 为EVs相关的各学科科研工作、及EVs检测作为技术手段的临床医疗研究提供强有力的技术支持。

图6  案例文献2

        在比较 FBS 与 HPL 培养的 MSC-EVs 研究中（图6），NTA 作为核心表征工具：测定 F-EVs 与 H-EVs 粒径均约 150 nm，量化 H-EVs 颗粒浓度较 F-EVs 高 1.5 倍，证实 HPL 促进 EVs 分泌；通过颗粒数 / 蛋白质量比验证两者纯度均超 1×10⁸ particles/μg，符合临床级标准（图7）；在体外血管生成和体内肾损伤模型中，基于 NTA 浓度数据实现 EVs 给药剂量的标准化控制。NTA 通过精准量化 EVs 物理特性，为无动物源培养基筛选、EVs 产量评估及功能实验标准化提供数据支撑，推动 MSC-EVs 在再生医学中的机制研究与转化应用。

图7  不同通路的充质干细胞（MSCs）及其来源细胞外囊泡（MSC-EVs）的特性分析

        该研究证实，NTA技术通过精准量化外泌体的物理特性，为间充质干细胞来源外泌体的研究提供了核心数据支撑，其单颗粒追踪特性为解析 EVs 分泌动力学（如缺氧或药物刺激下的释放规律）提供了量化依据，推动 EVs 在再生医学中的机制研究与标准化转化，成为连接基础科研与临床应用的关键技术桥梁。

图8  案例文献3

        《Enhancing immunogenicity and release of in situ-generated tumor vesicles for autologous vaccines》研究中（图8），NTA 用于评估 Combo-NPs@shGNE 纳米颗粒原位疫苗策略：检测到该策略使 TEV 释放率提升至 56.44%（较空白组高 9.57 倍），TEV 浓度达 1.2×10⁸ particles/10⁶ cells，粒径分布更集中；体内肿瘤组织中，NTA 显示治疗组 TEV 颗粒数较空白组提升 1.32 倍，且与 HSP70 等免疫刺激分子含量正相关；TEV 浓度数据直接关联肿瘤生长抑制率，成为评估疫苗效果的关键参数（图9）。NTA 通过量化 TEV 粒径、浓度及释放效率，为原位疫苗的机制验证与疗效评估提供了核心技术支撑。

图9  NTA测定 TEV 的粒径分布和粒子数

        在该研究证明，纳米颗粒跟踪分析（NTA）技术完全能够作为验证研究假设和评估治疗效果的核心工具，用于细胞外囊泡（包括外泌体）的粒径分布、颗粒浓度及释放效率的定量表征，发挥至关重要的作用。

        纳米颗粒跟踪分析（NTA）技术凭借其高分辨率、快速检测和可视化验证等优势和对多分散体系检测的优良表现，在外泌体相关各领域研究中发挥着不可或缺的重要作用：在基础研究中，其通过解析外泌体的粒径分布与浓度特征，助力揭示外泌体在细胞间通讯中的作用机制，如肿瘤细胞外泌体促血管生成、神经元外泌体调控神经信号传导等过程；在再生医学领域，NTA 为间充质干细胞来源外泌体（MSC-EVs）的培养基筛选、产量评估及质量控制提供核心支撑，推动无动物源培养基的临床转化；在临床治疗策略开发中，可用于监测肿瘤原位疫苗诱导的囊泡释放效率、评估免疫原性囊泡的粒径均一性，为个性化疫苗优化提供量化依据；在疾病诊断与疗效监测方面，NTA 通过动态追踪血液、尿液等样本中外泌体的物理特性变化，为肿瘤早期筛查、病程进展判断及治疗响应评估提供技术支持；此外，在药物递送系统研究中，NTA 可实时监测外泌体载药前后的粒径变化与浓度波动，辅助优化载药工艺并确保给药剂量标准化，全面推动外泌体在精准医学中的应用。
        NTA已成为外泌体研究的不可替代的工具。未来，随着技术的不断创新，NTA 必将进一步推动外泌体的基础研究与临床转化，在相关的生物生命科学研究、各类疾病诊断和治疗中发挥更大作用。